肉毒梭菌檢出(增菌產(chǎn)毒培養試驗)

取庖肉培養基3支，煮沸10～15min，做如下處理：

第一支：急速冷卻，接種檢樣均質(zhì)液1～2mL ；

第二支：冷卻至60℃，接種檢樣，繼續于60℃保溫 10min， 急速冷卻；

第三支：接種檢樣，繼續煮沸加熱10min，急速冷卻。

 　以上接種物于30℃培養5d，若無(wú)生長(cháng)，可再培養10d。培養到期，若有生長(cháng)，取培養液離心，以其上清液進(jìn)行毒素檢測試驗，方法同6.1，陽(yáng)性結果證明檢樣中有肉毒梭菌存在。

分離培養

選取經(jīng)毒素檢測試驗證實(shí)含有肉毒梭菌的前述增菌產(chǎn)毒培養物(必要時(shí)可重復一次適宜的加熱處理)接種卵黃瓊脂平板，35℃厭氧培養48h。肉毒梭菌在卵黃瓊脂平板上生長(cháng)時(shí)，菌落及周?chē)�培養基表面覆蓋著(zhù)特有的虹彩樣(或珍珠層樣)薄層，但G型菌無(wú)此現象。根據菌落形態(tài)及菌體形態(tài)挑取可疑菌落，接種庖肉培養基，于30℃培養5d，進(jìn)行毒素檢測及培養特性檢查確證試驗。

培養特性檢查：接種卵黃瓊脂平板，分成2份，分別在35℃的需氧和厭氧條件下培養48h，觀(guān)察生長(cháng)情況及菌落形態(tài)。肉毒梭菌只有在厭氧條件下才能在卵黃瓊脂平板上生長(cháng)并形成具有上述特征的菌落，而在需氧條件下則不生長(cháng)。

注：

        為檢出蜂蜜中存在的肉毒梭菌，蜂蜜檢樣需預溫37℃(流質(zhì)蜂蜜)，或52～53℃(晶質(zhì)蜂蜜)，充分攪拌后立即稱(chēng)取20g，溶于100mL滅菌蒸餾水(37℃或52～53℃)，攪拌稀釋?zhuān)��?000～10000r/min離心30min(20℃)，沉淀，加滅菌蒸餾水1mL，充分搖勻，等分各半，接種庖肉培養基(8～10mL)各1支，分別在30℃及37℃下厭氧培養7天，按6.2進(jìn)行肉毒毒素檢測。

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