平板菌落計數法

樣品的稀釋

固體和半固體食品：以無(wú)菌操作取25g樣品,放入裝有225 mL生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內,于8000 ～10000r/min均質(zhì)1min～2min,制成1:10樣品勻液，或放入225 mL生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。

液體食品：以無(wú)菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無(wú)菌玻璃瓶(瓶?jì)阮A置適當數量的玻璃珠)中,充分混勻，制成1:10的樣品勻液。

用1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1：10的樣品勻液1 mL加到裝有9 mL PBS的稀釋管中，充分混勻制成1：100的樣品勻液。

制備十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無(wú)菌吸管或吸頭。

根據對樣品污染狀況的估計，選擇2～3個(gè)適宜的連續稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個(gè)稀釋度分別吸取1mL樣品均勻加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內。同時(shí)分別取1mL稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內作空白對照。

及時(shí)將15~20ml冷卻至46℃平板計數瓊脂培養基（可放置于46℃ ±1℃恒溫水浴箱內保溫）傾注平板，并轉動(dòng)平皿使其混合均勻。

瓊脂凝固后，將平板翻轉，置36±1℃培養48±2h。水產(chǎn)品30±1℃培養72±3h。

如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生成的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基（4mL），凝固后翻轉平板，進(jìn)行培養。

菌落計數

可用肉眼觀(guān)察，必要時(shí)用放大鏡檢查，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位（（CFU）表示。

選取菌落數在30~300之間、無(wú)蔓延菌落生成的平板計數菌落總數。低于30 CFU的平板記錄具體菌落數，大于300的可記錄為多不可計。每個(gè)稀釋度的菌落數應采用兩個(gè)平板的平均數。

其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(cháng)時(shí)，則不宜采用，而應以無(wú)片狀菌落生長(cháng)的平板作為該稀釋度的菌落數；若片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個(gè)平板的菌落數乘2代表一個(gè)平板的菌落數。

當平板上出現菌落間無(wú)明顯界限的鏈狀生長(cháng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計數。  

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