免疫磁珠捕獲與分離大腸埃希氏菌

應按照生產(chǎn)商提供的使用說(shuō)明進(jìn)行免疫磁珠捕獲與分離。當生產(chǎn)商的使用說(shuō)明與下面的描述可能有偏差時(shí)，按生產(chǎn)商提供的使用說(shuō)明進(jìn)行。

將Eppendorff 管按樣品和質(zhì)控菌株進(jìn)行編號，每個(gè)樣品使用1 Eppendorff管，然后插入到磁板架上。在漩渦混合器上輕輕振蕩E.coli O157 免疫磁珠溶液后，用開(kāi)蓋器打開(kāi)每個(gè)Eppendorff 管的蓋子，每管加入20μLE.coli O157 免疫磁珠懸液。

取mEC+n 肉湯增菌培養物1mL，加入到Eppendorff 管中，蓋上蓋子，然后輕微振蕩10s。每個(gè)樣品更換1 只加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開(kāi)進(jìn)行，避免交叉污染。

結合：在18℃～30℃環(huán)境中，將上述Eppendorff 管連同磁板架放DynalMX1 樣品混合器上轉動(dòng)或用手輕微轉動(dòng)10min，使E.coli O157 與免疫磁珠充分接觸。

捕獲：將磁板插入到磁板架中濃縮磁珠。在3min 內不斷地傾斜磁板架，確保懸液中與蓋子上的免疫磁珠全部被收集起來(lái)，此時(shí)，在Eppendorff 管壁中間明顯可見(jiàn)圓形或橢圓形棕色聚集物。

吸取上清液：取1 支無(wú)菌加長(cháng)吸管，從免疫磁珠聚集物對側深入液面，輕

輕吸走上清液。當吸到液面通過(guò)免疫磁珠聚集物時(shí)，應放慢速度，以確保免疫磁珠不被吸走。

免疫磁珠的滑落：某些樣品特別是那些富含脂肪的樣品，其磁珠聚集物易于滑落到管底。在吸取上清液時(shí)，很難做到不丟失磁珠，在這種情況下，可保留50μL～100μL 上清液于Eppendorff 管中。如果在后續的洗滌過(guò)程中也這樣做的話(huà)，脂肪的影響將減小，也可達到充分捕獲的目的。

洗滌：從磁板架上移走磁板，在每個(gè)Eppendorff 中加入1mL PBSTween20洗液，轉動(dòng)磁板架3 次以上，洗滌免疫磁珠混合物。

免疫磁珠懸�。阂谱叽虐�，將免疫磁珠重新懸浮在100μL PBS-Tween20 洗液中。

涂布平板

用漩渦混合器將免疫磁珠混勻，用加樣器各取50μL 免疫磁珠懸液分別轉移至CT-SMAC 平板和改良CHROMagar O157 顯色瓊脂平板一側，然后用無(wú)菌涂布棒將免疫磁珠涂布平板的一半，再用接種環(huán)劃線(xiàn)接種平板的另一半。待瓊脂表面水分完全吸收后，翻轉平板，于36℃±1℃培養18h～24h

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