菌株保存保藏方法

對于每個(gè)陽(yáng)性樣品，保存檢出的食源性致病菌分離株，以便用于進(jìn)一步的研究；分離菌株的編號應具有唯一性，標識清楚；標簽應防水、字跡耐凍；各省級實(shí)驗室應建立食源性致病菌菌種庫，妥善保存食源性致病菌分離株。

推薦常見(jiàn)的食源性致病菌菌株保藏方法有以下2 種：

1. 甘油冷凍保藏法

（1） 保藏時(shí)間

本方法適合于菌種的長(cháng)期保藏，保藏時(shí)間可達10 年以上。

（2） 方法

在充分加熱混勻的BHI（副溶血性弧菌、創(chuàng )傷弧菌保存時(shí)BHI 中NaCl 應加

至3%）中加入甘油，使甘油達總體積的40%～50%，充分混合，分裝至菌種保存管（2 mL 左右），121 ℃高壓20 min，備用；使用無(wú)菌棉簽從非選擇性平板上取新鮮純培養菌落，加入裝有BHI 和甘油的無(wú)菌凍存管中，混勻后，-80℃保存（如果無(wú)-80℃冰箱，可選擇-40℃保存，但保存效果較差）。

（3） 注意事項

每株菌至少保存2 管，分別放置在2 個(gè)不同凍存盒中，一盒日常使用，另外一盒長(cháng)期保存；使用時(shí)，取出相應的凍存盒，快速接種，以避免反復凍融；使用時(shí)，無(wú)菌操作，避免污染。

2. 半固體保藏法

（4） 保藏時(shí)間

本方法適合于短期菌種保藏，保藏時(shí)間一般為3～6 個(gè)月。

（5） 方法

無(wú)菌操作，挑取待保藏的菌種，穿刺接種約含5 mL 無(wú)菌半固體營(yíng)養瓊脂或

半固體腦心浸液瓊脂（副溶血性弧菌、創(chuàng )傷弧菌保存時(shí)BHI 中NaCl 應加3%）的小試管（約15 mm×100 mm）中。無(wú)菌操作吸取滅菌液體石蠟，加入已培養好的菌種上面，液體石蠟用量以高出半固體1 cm 為準，使菌種與空氣隔絕。將試管直立，置4 ℃或室溫（副溶血性弧菌、創(chuàng )傷弧菌）下保存。

（6） 注意事項

副溶血性弧菌和創(chuàng )傷弧菌應放置室溫保存。

此外，也可以購買(mǎi)商品化的菌種保存管保存菌株，具體方法見(jiàn)生產(chǎn)廠(chǎng)家提供的操作指南。

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