菌落總數測定平板接種與培養

1.根據食品衛生標準要求和對樣品污染情況的估計，選擇2~3個(gè)稀釋度。加入樣品時(shí)要注意外來(lái)的污染。

2.培養基傾注的溫度與厚度是實(shí)驗正確與否的關(guān)鍵。（傾注的溫度：一般45℃左右，溫度過(guò)高會(huì )造成已受損傷的菌細胞死亡。厚度：直徑9cm的平皿一般要求15～20mL培養基，若培養基太薄，在培養過(guò)程中可能因水分蒸發(fā)而影響細菌的生長(cháng)）。

3.為防止細菌增殖及平板底部產(chǎn)生片狀菌落，在加入樣液后，應在20min內傾注培養基。檢樣與培養基混勻時(shí)，可先向一個(gè)方向旋轉，然后再向相反方向旋轉。旋轉中應防止混合物濺到皿邊的上方。

4.培養基凝固后，應盡快將平皿翻轉培養，保持瓊脂表面干燥，避免菌落蔓延生長(cháng)，影響計數。

5.為控制污染，在實(shí)驗過(guò)程中，應在工作臺上打開(kāi)一塊瓊脂平板，其暴露時(shí)間應與檢樣從制備、稀釋到加入平皿時(shí)所暴露的最長(cháng)時(shí)間相當，然后與檢樣一同培養，以了解檢樣在操作過(guò)程中有無(wú)受到來(lái)自外界的污染。

6.培養溫度:

   每種不同樣品中的細菌都有一定的生理特性，培養時(shí)應用不同的營(yíng)養條件及生理條件可能得出不同的結果，因而應根據檢測標準的要求選擇適當的培養溫度和培養時(shí)間。

食品：36±１℃， 48±2h。

飲用水：36±１℃， 48h。

水產(chǎn)品：30±１℃， 72±3h。 (36℃培養和30℃培養結果差別較大，同樣水產(chǎn)品48h結果和72h也有差別。)

7.對照試驗：

檢樣的稀釋液中往往帶有食品顆粒，在這種情況下，為避免與細菌菌落混淆，可作同一稀釋度檢樣對照，不經(jīng)培養，置4℃環(huán)境放置，在計數時(shí)用于對照。

可選用TTC平板計數瓊脂做培養基。一般加入量0.5%～1.0%濃度的TTC，100mL培養基中加入1mL。

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