大腸埃希氏菌增菌分離培養基原理

增菌

以無(wú)菌操作取檢樣25g(mL)加入到含有225mL mEC+n肉湯的均質(zhì)袋中，在拍擊式均質(zhì)器上連續均質(zhì)1～2　min。于36±1℃培養18～24h。同時(shí)做陽(yáng)性及陰性對照。

mEC肉湯

胰蛋白胨提供碳氮源；新生霉素、3號膽鹽抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，特別抑制革蘭氏陽(yáng)性桿菌和糞鏈球菌；乳糖是可發(fā)酵的糖類(lèi)；磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為緩沖劑；氯化鈉可維持均衡的滲透壓。

分離

取增菌后或篩選試驗陽(yáng)性的mEC+n肉湯，分別劃線(xiàn)或適當稀釋后取0.1mL涂布接種于CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上，于36±1℃培養18～24h，觀(guān)察菌落。必要時(shí)將混合菌落分純。在CT-SMAC平板上，發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色；典型菌落為不發(fā)酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無(wú)色菌落，中心呈現較暗的灰褐色，用接種針挑起時(shí)無(wú)拉絲現象。在改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上為圓形、較小的菌落，中心呈淡紫色-紫紅色，邊緣無(wú)色或淺灰色。

改良山梨醇麥康凱(CT-SMAC)瓊脂

蛋白胨提供氮源、維生素和生長(cháng)因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；山梨醇為可發(fā)酵的糖類(lèi)；三號膽鹽、結晶紫抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，亞碲酸鉀抑制非0157的大腸桿菌，頭孢克肟抑制變形桿菌；中性紅為pH指示劑；瓊脂是培養基的凝固劑。

增菌后的肉湯在取樣前，應輕微搖晃混勻。

劃線(xiàn)時(shí)應多次往返，保證分離效果。

大部分非O157 E.coli發(fā)酵山梨醇，仍有6%不發(fā)酵山梨醇，它們與摩根氏菌和哈夫尼亞菌一樣在CT-SMAC上表現為與O157相同的菌落特征。

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