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供試品的控制菌檢查應按經(jīng)方法適用性試驗確認的方法進(jìn)行。
陽(yáng)性對照試驗 陽(yáng)性對照試驗方法同供試品的控制菌檢查,對照菌的加量應不大于100cfu。陽(yáng)性對照試驗應檢出相應的控制菌。
陰性對照試驗 以稀釋劑代替供試液照相應控制菌檢查法檢查，陰性對照試驗應無(wú)菌生長(cháng)。如果陰性對照有菌生長(cháng)，應進(jìn)行偏差調查。
耐膽鹽革蘭陰性菌(Bile-Tolerant Gram-Negative Bacteria)
供試液制備和預培養 取供試品，用胰酪大豆胨液體作為稀釋劑照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數法” （通則1105）制成1：10 供試液，混勻，在20～25℃培養，培養時(shí)間應使供試品中的細菌充分恢復但不增殖（約2 小時(shí)）。
未檢出試驗
除另有規定外，取相當于1g 或1mL 供試品的上述預培養物接種至腸道菌增菌液體培養基中，30～35℃培養24～48 小時(shí)后，劃線(xiàn)接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基平板上，30～35℃培養18～24 小時(shí)。如果平板上無(wú)菌落生長(cháng)，判供試品未檢出耐膽鹽革蘭陰性菌。
定量試驗
選擇和分離培養 取相當于0.1g、0.01g 和0.001g（或0.1mL、0.01mL 和0.001mL）供試品的預培養物或其稀釋液分別接種至腸道菌增菌液體培養基中，30～35℃培養24～48 小時(shí)。上述每一培養物分別劃線(xiàn)接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基平板上，30～35℃培養18～24 小時(shí)。
結果判斷 若紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基平板上有菌落生長(cháng)，則對應培養管為陽(yáng)性，否則為陰性。根據各培養管檢查結果，從表2 查對1g 或1ml 供試品中含有耐膽鹽革蘭陰性菌的最大可能數。
大腸埃希菌(Escherichia coli)
供試液制備和增菌培養 取供試品，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數法” （通則1105）制成1：10 供試液。取相當于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定的）的胰酪大豆胨液體培養基中，混勻，30～35℃培養18～24 小時(shí)。
選擇和分離培養 取上述預培養物1mL 接種至100mL 麥康凱液體培養基中，42～44℃培養24～48 小時(shí)。取麥康凱液體培養物劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂培養基平板上，30～35℃培養18～72 小時(shí)。
結果判斷 若麥康凱瓊脂培養基平板上有菌落生長(cháng)，應進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗, 確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養基平板上沒(méi)有菌落生長(cháng)，或雖有菌落生長(cháng)但鑒定結果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。
沙門(mén)菌（Salmonella）
供試液制備和增菌培養 取10g 或10mL 供試品直接或處理后接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定的）的胰酪大豆胨液體培養基中，混勻，30～35℃培養18～24 小時(shí)。
選擇和分離培養 取上述預培養物0.1mL 接種至10mL RV 沙門(mén)增菌液體培養基中，30～35℃培養18～24 小時(shí)。取少量RV 沙門(mén)菌增菌液體培養物劃線(xiàn)接種于木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基平板上，30～35℃培養18～48 小時(shí)。
沙門(mén)菌在木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基平板上生長(cháng)良好，菌落為淡紅色或無(wú)色、透明或半透明、中心有或無(wú)黑色。用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養基高層斜面上進(jìn)行斜面和高層穿刺接種，培養18～24 小時(shí)，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
結果判斷 若木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基平板上有疑似菌落生長(cháng)，且三糖鐵瓊脂培養基的斜面為紅色、底層為黃色，或斜面黃色、底層黃色或黑色，應進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為沙門(mén)菌。如果平板上沒(méi)有菌落生長(cháng)，或雖有菌落生長(cháng)但鑒定結果為陰性，或三糖鐵瓊脂培養基的斜面未見(jiàn)紅色、底層未見(jiàn)黃色；或斜面黃色、底層未見(jiàn)黃色黑色，判供試品未檢出沙門(mén)菌。
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）
供試液制備和增菌培養 取供試品，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數法” （通則1105）制成1：10 供試液。取相當于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定的）的胰酪大豆胨液體培養基中，混勻。30～35℃培養18～24 小時(shí)。
選擇和分離培養 取上述預培養物劃線(xiàn)接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基平板上，30～35℃培養18～72 小時(shí)。
取上述平板上生長(cháng)的菌落進(jìn)行氧化酶試驗，或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
氧化酶試驗 將潔凈濾紙片置于平皿內,用無(wú)菌玻棒取上述平板上生長(cháng)的菌落涂于濾紙片上，滴加新配制的1％二鹽酸二甲基對苯二胺試液，在30 秒內若培養物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗陽(yáng)性,否則為陰性。
結果判斷 若溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基平板上有菌落生長(cháng)，且氧化酶試驗陽(yáng)性，應進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為銅綠假單胞菌。如果平板上沒(méi)有菌落生長(cháng)，或雖有菌落生長(cháng)但鑒定結果為陰性，或氧化酶試驗陰性，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
供試液制備和增菌培養 取供試品，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數法” （通則1105）制成1：10 供試液。取相當于1g 或1mL 供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定的）的胰酪大豆胨液體培養基中，混勻。30～35℃培養18～24 小時(shí)。
選擇和分離培養 取上述預培養物劃線(xiàn)接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養基平板上，30～35℃培養18～72 小時(shí)。
結果判斷 若甘露醇氯化鈉瓊脂培養基平板上有黃色菌落或外周有黃色環(huán)的白色菌落生長(cháng)，應進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗, 確證是否為金黃色葡萄球菌；若平板上沒(méi)有與上述形態(tài)特征相符或疑似的菌落生長(cháng)，或雖有相符或疑似的菌落生長(cháng)但鑒定結果為陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。
梭菌（Clostridia）
供試液制備和熱處理 取供試品，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數法” （通則1105）制成1：10 供試液。取相當于1g 或1mL 供試品的供試液2 份，其中1 份置80℃保溫10 分鐘后迅速冷卻。
選擇和分離培養 將上述2 份供試液分別接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定的）的梭菌增菌培養基中，置厭氧條件下30～35℃培養48 小時(shí)。取上述每一培養物少量，分別涂抹接種于哥倫比亞瓊脂培養基平板上，置厭氧條件下30～35℃培養48～72 小時(shí)。
過(guò)氧化氫酶試驗 取上述平板上生長(cháng)的菌落，置潔凈玻片上，滴加3%過(guò)氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生,為過(guò)氧化氫酶試驗陽(yáng)性,否則為陰性。
結果判斷 若哥倫比亞瓊脂培養基平板上有帶或不帶芽孢的厭氧桿菌生長(cháng)，且過(guò)氧化氫酶反應陰性的，應進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為梭菌；如果哥倫比亞瓊脂培養基平板上沒(méi)有厭氧桿菌生長(cháng)，或雖有相符或疑似的菌落生長(cháng)但鑒定結果為陰性，或過(guò)氧化氫酶反應陽(yáng)性，判供試品未檢出梭菌。
白色念珠菌（Candida albicans）
供試液制備和增菌培養 取供試品，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數法” （通則1105）制成1：10 供試液。取相當于1g 或1mL 供試品的供試液，接種到100mL 沙氏葡萄糖液體培養基中，混勻，30～35℃培養3～5 天。
選擇和分離 取上述預培養物劃線(xiàn)接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上，30～35℃培養24～48 小時(shí)。
白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養基上生長(cháng)的菌落呈乳白色，偶見(jiàn)淡黃色,表面光滑有濃酵母氣味,培養時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺褶。挑取疑似菌落接種至念珠菌顯色培養基平板上，培養24～48 小時(shí)（必要時(shí)延長(cháng)至72 小時(shí)），或采用其它適宜方法進(jìn)一步鑒定。
結果判斷 若沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上有疑似菌落生長(cháng)，且疑似菌在念珠菌顯色培養基平板上生長(cháng)的菌落陽(yáng)性反應，應進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗, 確證是否為白色念珠菌；若沙氏葡萄糖瓊脂培養基平板上沒(méi)有菌落生長(cháng)，或雖有菌落生長(cháng)但鑒定結果為陰性，或疑似菌在念珠菌顯色培養基平板上生長(cháng)的菌落呈陰性反應，判供試品未檢出白色念珠菌。
