培養基適用性檢查和控制菌檢查方法適用性試驗-2015藥典

供試品控制菌檢查中所使用的培養基應進(jìn)行適用性檢查。

供試品的控制菌檢查方法應進(jìn)行方法適用性試驗，以確認所采用的方法適合

于該產(chǎn)品的控制菌檢查。

若檢驗程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗結果時(shí)，控制菌檢查方法應重新進(jìn)行適用性試驗。

菌種及菌液制備

菌種 試驗用菌株的傳代次數不得超過(guò)5 代（從菌種保藏中心獲得的干燥菌

種為第0 代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC（B）26 003〕

銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC（B）10 104〕

大腸埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC（B）44 102〕

乙型副傷寒沙門(mén)菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC（B）50 094〕

白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC（F）98 001〕

生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕

菌液制備 將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、沙門(mén)菌分別接種于胰酪大豆胨液體培養基中或在胰酪大豆胨瓊脂培養基上，30～35℃培養18～24 小時(shí)；將白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養基上或沙氏葡萄糖液體培養基中，20～25℃培養2～3 天；將生孢梭菌接種于梭菌增菌培養基中置厭氧條件下30～35℃培養24～48 小時(shí)或接種于硫乙醇酸鹽流體培養基中30～35℃培養18～24 小時(shí)。上述培養物用pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的菌懸液。

菌液制備后若在室溫下放置，應在2 小時(shí)內使用；若保存在2～8℃，可在

24 小時(shí)內使用。生孢梭菌孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，穩定的孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過(guò)的貯存期內使用。

陰性對照

為確認試驗條件是否符合要求，應進(jìn)行陰性對照試驗， 陰性對照試驗應無(wú)菌生長(cháng)。如陰性對照有菌生長(cháng)，應進(jìn)行偏差調查。

培養基適用性檢查

控制菌檢查用的成品培養基、由脫水培養基或按處方配制的培養基均應進(jìn)行培養基的適用性檢查。

控制菌檢查用培養基的適用性檢查項目包括促生長(cháng)能力、抑制能力及指示特性的檢查

液體培養基促生長(cháng)能力檢查 分別接種不大于100cfu 的試驗菌（見(jiàn)表1）于被檢培養基和對照培養基中，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及不長(cháng)于規定的最短培養時(shí)間下培養，與對照培養基管比較，被檢培養基管試驗菌應生長(cháng)良好。

固體培養基促生長(cháng)能力檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu 的試驗菌于被檢培養基和對照培養基平板上，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及不長(cháng)于規定的最短培養時(shí)間下培養，被檢培養基與對照培養基上生長(cháng)的菌落大小、形態(tài)特征應一致。

培養基抑制能力檢查 接種不少于100cfu 的試驗菌于被檢培養基和對照培養基中，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及不短于規定的最長(cháng)培養時(shí)間下培養，試驗菌應不得生長(cháng)。

培養基指示特性檢查 用涂布法分別接種不大于100cfu 的試驗菌于被檢培養基和對照培養基平板上，在相應控制菌檢查規定的培養溫度及不長(cháng)于規定的最短培養時(shí)間下培養，被檢培養基上試驗菌生長(cháng)的菌落大小、形態(tài)特征、指示劑反應情況等應與對照培養基一致。

控制菌檢查方法適用性試驗

供試液制備 按下列“供試品檢查”中的規定制備供試液。

試驗菌 根據各品種項下微生物限度標準中規定檢查的控制菌選擇相應試驗菌株，確認耐膽鹽革蘭陰性菌檢查方法時(shí),采用大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為試驗菌。

適用性試驗 按控制菌檢查法取規定量供試液及不大于100cfu 的試驗菌接

入規定的培養基中；采用薄膜過(guò)濾法時(shí),取規定量供試液,過(guò)濾,沖洗,試驗菌應加在最后一次沖洗液中,過(guò)濾后,注入規定的培養基或取出濾膜接入規定的培養基中。依相應的控制菌檢查方法，在規定的溫度及最短時(shí)間下培養，應能檢出所加試驗菌相應的反應特征。

結果判斷 上述試驗若檢出試驗菌，按此供試液制備法和控制菌檢查方法進(jìn)行供試品檢查；若未檢出試驗菌，應消除供試品的抑菌活性（見(jiàn)非無(wú)菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計數法（附錄×××）中的“抗菌活性的去除或滅活”），并重新進(jìn)行方法適用性試驗。

如果經(jīng)過(guò)試驗確證供試品對試驗菌的抗菌作用無(wú)法消除，可認為受抑制的微生物不可能存在于該供試品中，選擇抑菌成份消除相對徹底的方法進(jìn)行供試品的檢查。

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