果糖-6-磷酸鹽磷酸酮酶（F6PPK）測定雙歧桿菌

試劑

（1）0.05mol/L磷酸鹽緩沖液pH6.5+500mg/L半胱氨酸-HCl。

（2）6mg/mLNaF+10mg/mL碘乙酸鈉或鉀

（3）果糖-6-磷酸鹽（鈉鹽，70%-98%純度）80mg/mL水溶液。

（4）鹽酸羥胺(Hydroxy Lamine-HCl) 139mg/mL水溶液，使用時(shí)以NaOH中和至pH6.5。

（5）15g/100mL 三氯乙酸(TCA) 水溶液。

（6）4mol/L HCl。

（7）0.5 g/100mL FeCl3·6H2O溶于0.1mol/L HCl中。

1、挑取BBL瓊脂上純培養的雙歧桿菌接種到TPY液體培養基, 絕對厭氧，36±1℃ 培養72h±3h。從10mL TPY培養液于3000r／min離心5min，棄上清液，細胞用上述試劑（1）洗滌2次，然后懸浮于1.0mL試劑（1）中。將盛有細胞懸液的容器置于一冰浴內，用超聲波處理20min，以破碎細胞。然后在超聲波處理物中加入試劑（2）和試劑（3）各0.25mL，置于37℃保溫30 min。保溫后在溶液中入1.5mL試劑（4），置室溫5 min。加入試劑（5）和試劑（6）各1mL，置室溫5 min。然后加入1mL試劑（7）觀(guān)察溶液顏色。

2、結果判定：經(jīng)以上程序測定如顯紅褐色或紅紫色，則果糖-6-磷酸鹽磷酸酮酶為陽(yáng)性，否則為陰性。

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