銅綠假單胞菌微生物限度檢查法

取供試液10ml（相當于供試品1g、1ml、10cm2），直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的膽鹽乳糖培養基中，培養18～24 小時(shí)。取上述培養物，劃線(xiàn)接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基的平板上，培養18～24 小時(shí)。

銅綠假單胞菌典型菌落呈扁平、無(wú)定形、周邊擴散、表面濕潤，灰白色，周圍時(shí)有藍綠色素擴散。如平板上無(wú)菌落生長(cháng)或生長(cháng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。如平板生長(cháng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應挑選2～3 個(gè)菌落，分別接種于營(yíng)養瓊脂培養基斜面上，培養18～24小時(shí)。取斜面培養物進(jìn)行革蘭染色、鏡檢及氧化酶試驗。

氧化酶試驗 取潔凈濾紙片置于平皿內，用無(wú)菌玻棒取斜面培養物涂于濾紙片上，滴加新配制的1％二鹽酸二甲基對苯二胺試液，在30 秒內若培養物呈粉紅色并逐漸變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗陽(yáng)性，否則為陰性。

若斜面培養物為非革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌或氧化酶試驗陰性，均判供試品未檢出銅綠假單胞菌。否則，應進(jìn)行綠膿菌素試驗。

綠膿菌素（Pyocyanin）試驗 取斜面培養物接種于PDP 瓊脂培養基斜面上，培養24 小時(shí)，加三氯甲烷3～5ml 至培養管中，攪碎培養基并充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入1mol/L 鹽酸試液約1ml，振搖后，靜置片刻，觀(guān)察。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠膿菌素試驗陽(yáng)性，否則為陰性。同時(shí)用未接種的PDP 瓊脂培養基斜面同法作陰性對照，陰性對照試驗應呈陰性。

若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗陽(yáng)性及綠膿菌素試驗陽(yáng)性，判供試品檢出銅綠假單胞菌。若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗陽(yáng)性及綠膿菌素試驗陰性，應繼續進(jìn)行適宜的鑒定試驗，確認是否為銅綠假單胞菌。

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