選擇2~3個(gè)適宜的連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個(gè)稀釋度分別吸取0.1mL接種到MYP瓊脂平板上,每稀釋度接種兩個(gè)MYP瓊脂平板。用無(wú)菌L棒涂布整個(gè)平板,注意不要觸及平板邊緣。使用前,如MYP瓊脂平板表面有水珠,可放在25℃ ~ 50℃的培養箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。
涂布后,將平板置于30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h后(原標準為36 ℃±1 ℃培養12 h~20 h) ,選取具有15個(gè)~150個(gè)典型或可疑蠟樣芽胞桿菌菌落的平板,進(jìn)行計數。并計算同一稀釋度兩個(gè)平板的平均菌落數。如果菌落不典型,可繼續培養18 h~24 h再計數。
計數后,從每個(gè)平板選取至少5個(gè)已計數的典型或可疑菌落,如果一個(gè)平板上少于5個(gè)典型或可疑菌落,則取所有典型或可疑菌落,分別劃線(xiàn)接種于營(yíng)養瓊脂平板, 30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h,進(jìn)行確證實(shí)驗。
根據確證實(shí)驗確定為蠟樣芽胞桿菌的菌落數,按比例計算出該平板上蠟樣芽胞桿菌菌落數,然后計算同一稀釋度兩個(gè)平板的平均蠟樣芽胞桿菌數,再乘其稀釋倍數,再乘以10,即得每g(mL)樣品中蠟樣芽胞桿菌數并作出報告。
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