采樣應在無(wú)菌操作下進(jìn)行。將蘸有無(wú)菌生理鹽水的無(wú)菌棉拭子在推子前部上下均勻各涂抹3次,或在使用的刀刃、剪刃的兩側各涂抹一次采樣。將采樣后的棉拭子剪去手接觸部分,放入10mL滅菌生理鹽水中,充分振搖,取5mL放入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管中,置36℃±1℃溫箱中培養24h,如乳糖膽鹽發(fā)酵管中不產(chǎn)氣,則可報告大腸菌群陰性,如有產(chǎn)酸、產(chǎn)氣者,則進(jìn)行分離培養。
分離培養:將產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的發(fā)酵管劃線(xiàn)接種在伊紅美藍瓊脂平板上,置37℃溫箱培養18~24h,觀(guān)察菌落形態(tài),做革蘭染色和證實(shí)試驗。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色,具有金屬光澤。
證實(shí)試驗:挑取可以大腸桿菌菌落1~2個(gè)進(jìn)行革蘭染色鏡檢,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管于36℃±1℃培養24h,觀(guān)察產(chǎn)氣情況。
結果報告
如乳糖管最終產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、革蘭染色為陰性無(wú)芽孢桿菌,即可報告大腸菌群陽(yáng)性
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