在微生物操作中常見(jiàn)問(wèn)題的討論與分析

1、 劃線(xiàn)獲得單個(gè)菌落的方法。劃不出單個(gè)菌落的原因：

（1） 平板上有過(guò)多的水分；

（2） 劃線(xiàn)時(shí)接種環(huán)未經(jīng)反復灼燒。

（3） 多區劃線(xiàn)，三區或四區劃線(xiàn)。

2、 涂布和傾注的區別：

涂布利于觀(guān)察，但由于涂布棒上會(huì )帶有少量的菌液，影響計數的準確性。

涂布更為準確，但不利于觀(guān)察菌落的狀態(tài)。

3、 培養基配制時(shí)應注意的問(wèn)題：

（1）滅菌溫度要嚴格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養基溫度不應太高，過(guò)高會(huì )導致糖分焦化，影響質(zhì)量。

（2）瓊脂培養基不能反復溶化。反復溶化會(huì )破壞培養基中的營(yíng)養成分。

（3）培養基不能反復滅菌，反復滅菌也會(huì )導致?tīng)I養成分的破壞。

（4）含瓊脂的培養基滅菌后，要搖勻。

4、 平板的保存：大多數平板如VRBA、DC、、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

5、 產(chǎn)品的保存：

（1） 干粉培養基：避光干燥，結塊后不能使用。

（2） 亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時(shí)，要常溫解凍，避免水浴加熱。

（3） 抗生素類(lèi)：冷藏保存，溫度過(guò)高會(huì )導致靈敏度的下降。

（4） 兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會(huì )影響結果。

6、 觀(guān)察時(shí)間的掌握：按SN、GB等標準或培養基的使用說(shuō)明所述時(shí)間進(jìn)行觀(guān)察，時(shí)間過(guò)短或時(shí)間過(guò)長(cháng)，單菌落的特征都不會(huì )很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養基，時(shí)間短單菌落看不到卵磷脂環(huán)，時(shí)間長(cháng)綿羊李氏菌也會(huì )產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀(guān)察也如此，時(shí)間過(guò)長(cháng)，李氏菌使整個(gè)平板成黑色，不利于觀(guān)察單個(gè)菌落。

7、 添加劑的添加：

（1）溫度的掌握。卵黃和抗生素類(lèi)添加的溫度都不應太高。

（2）定量。過(guò)多會(huì )抑制一些目標菌，太少又導致雜菌的過(guò)度生長(cháng)。

8、 培養溫度的掌握：

（1）真菌類(lèi)。25-28℃培養

（2）細菌類(lèi)。李氏菌在增菌和生化中要求培養溫度在30℃左右。

（3）其他一般在36℃左右

9、 接種方法：常用的方法主要有劃線(xiàn)、三點(diǎn)接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。

10、革蘭氏染色方法：染色時(shí)間的掌握、沖洗的方法。

11、生化實(shí)驗：

（1）接種的方法

（2）氧化型和發(fā)酵型實(shí)驗操作

（3）陽(yáng)性菌種的對照

（4）接種前的純化。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行一系列的生化。

12、關(guān)于殺菌的幾個(gè)概念：

（1）抑制：是在亞抑制劑量因子作用下導致微生物生長(cháng)停止，但在移去這些因子后生長(cháng)仍可以恢復的生物學(xué)現象。

（2）死亡：在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長(cháng)時(shí)間的作用下，導致微生物生長(cháng)能力不可逆喪失，即使移去這種因子后生長(cháng)仍不能恢復的生物學(xué)現象。

（3）防腐：在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生長(cháng)的一種措施，它能防止食物腐敗或防止食物霉變。

（4）消毒：利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有病原微生物的一種措施，它可以起到防止感染和傳播的作用。

（5）滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內的所有病原微生物的一種措施。

（6）化療：利用具有選擇毒性的化學(xué)物質(zhì)，例磺胺、抗生素等對生物體內部被微生物感染的組織或病變細胞進(jìn)行治療，以殺死組織內的病原微生物或病變細胞，但對有機體無(wú)毒害作用的治療措施。

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