單增李斯特菌對小鼠的毒力試驗與MPN計數

將純培養物接種于TSB-YE中, 于30℃培養24 h, 離心, 棄上清液，用0.85滅菌生理鹽水制備成濃度為1010cfu/mL的菌懸液, 取此菌懸液進(jìn)行小鼠腹腔注射 3-5只, 每只0.5 mL，觀(guān)察小鼠死亡情況。致病株于2-5d 內死亡。試驗時(shí)可用已知菌作對照。單核細胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌（L.ivanovii）對小鼠有致病性。

MPN計數法

1 9管法，取檢樣25g（mL）加入裝有225mL LB1增菌液中，均質(zhì)制成1:10稀釋液，用滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL，注入含有9 mL LB1增菌液的試管內，振搖試管混勻，制備1:100的稀釋液。

2 另取1 mL滅菌吸管，按上條操作依次制備10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1 mL滅菌吸管。

3 根據對檢樣污染情況的估計，選擇三個(gè)連續的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3支含有9mL LB1增菌液的試管，每管接種1 mL。于30℃±1℃培養24h，移取1 mL，轉種于9mL LB2增菌液內，于30℃±1℃培養18h-24h。

4 分離、鑒定方法同第一法。

結果報告 根據證實(shí)為單核細胞增生李斯特氏菌陽(yáng)性的試管管數，查MPN檢索表（附錄B），報告每g（mL）單核細胞增生李斯特氏菌的MPN值。

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