致瀉大腸埃希氏菌標本處理與多重PCR

錄入時(shí)間:2014-4-4 11:26:13 來(lái)源：海博生物

標本處理

刮取營(yíng)養平板上的過(guò)夜新鮮培養物1 環(huán)～2 環(huán)，至裝有1 mL0.85%滅菌生理鹽水的Eppendorf 管內，混勻。4 ℃～8 ℃，12 000 r/min 離心15 min，棄去上清。沉淀加入100 μL 滅菌去離子水中，混勻。100 ℃煮沸12 min，12 000 r/min離心5 min，上清即為PCR 擴增模板，可直接用于PCR 反應。

多重PCR

五種致瀉大腸埃希氏菌目的基因多重PCR 擴增加樣體系見(jiàn)表5。PCR 反應條件：預變性94 ℃ 5 min。變性94 ℃ 30 s，復性63 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 1.5min，30 個(gè)循環(huán)。最后72 ℃延伸5 min

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