銅綠假單胞菌的確證性試驗

錄入時(shí)間:2014-4-2 11:30:28 來(lái)源：海博生物

營(yíng)養瓊脂

盡可能將所有經(jīng)濾膜過(guò)濾后，在36℃±1℃培養了20h～24h，將需驗證的可疑菌落劃線(xiàn)接種營(yíng)養瓊脂培養基，于36℃±1℃培養20h～24h。檢查再次純化的菌落，并將最初顯紅褐色的菌落進(jìn)行氧化酶試驗。

氧化酶試驗

取2 滴～3 滴新鮮配制的氧化酶試劑滴到放于平皿里的潔凈濾紙上。用鉑金絲接種環(huán)或玻璃棒，將適量的純種培養物涂布在預備好的濾紙上。在10s 內顯深藍紫色的視為陽(yáng)性反應。也可以按照商品化氧化酶測試產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行該項測試。

金氏B（King′s B）培養基

將上述呈紅褐色的且氧化酶反應呈陽(yáng)性的培養物接種于金氏B 培養基上，于36℃±1℃恒溫箱培養1d～5d。每天需取出在紫外燈下檢查其是否產(chǎn)生熒光性，將5d 內產(chǎn)生熒光的菌落記錄為陽(yáng)性。

乙酰胺肉湯

將5.4.1 中的純培養物接種到裝有乙酰胺肉湯的試管中，在36℃±1℃培養20h～24h。然后向每支試管培養物加入1 滴～2 滴鈉氏試劑，檢查各試管的產(chǎn)氨情況，如表現出從深黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽(yáng)性結果，否則為陰性。

計數

將產(chǎn)生綠膿色（藍色/綠色）或氧化酶反應呈陽(yáng)性，在紫外燈下產(chǎn)生熒光，且在乙酰胺肉湯中產(chǎn)氨的所有菌落證實(shí)為銅綠假單胞菌，并進(jìn)行計數。

通過(guò)計數培養后的濾膜上的菌落以獲得銅綠假單胞菌的數量。其他產(chǎn)生熒光或者呈紅棕色的菌落需要進(jìn)一步驗證。

注：最初濾膜上顯熒光的菌落經(jīng)氧化酶反應均呈陽(yáng)性，因此不需在這個(gè)測試中計數