諾如病毒核酸檢測

錄入時(shí)間:2014-3-20 11:19:20 來(lái)源：海博生物

普通RT-PCR檢測

普通RT-PCR反應體系

一步法普通RT-PCR 反應體系見(jiàn)表3。每個(gè)反應體系設置兩個(gè)平行反應。反應體系中各試劑的量可根據具體情況或不同的反應總體積進(jìn)行適當調整。也可采用RT-PCR 兩步法試劑盒。

以諾如病毒RNA 為陽(yáng)性對照，以不含有諾如病毒的樣品RNA 作為陰性對照，以水代替模板作為空白對照。

普通RT-PCR反應條件

反應條件為：42 ℃ 60 min；94 ℃ 10 min；94℃ 1 min，37 ℃ 90 s，72 ℃1 min，40 個(gè)循環(huán)；74 ℃ 7 min。

PCR擴增產(chǎn)物的電泳檢測用電泳緩沖液（1×TAE）、0.5μg/mL 溴化乙錠（或GoldView）配1.5%的瓊脂糖凝膠。在電泳槽中加入電泳緩沖液，使液面剛剛沒(méi)過(guò)凝膠。將9 μL PCR 擴增產(chǎn)物，加1μL 10×上樣緩沖液，點(diǎn)樣，電泳。電

壓根據電泳槽長(cháng)度來(lái)確定，一般控制在3 V/cm～5V/cm，當溴酚藍移動(dòng)到凝膠邊緣時(shí)關(guān)閉電源。凝膠成像系統觀(guān)察電泳結果，獲取并保存圖像。

實(shí)時(shí)熒光RT-PCR

實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應體系

一步法普通RT-PCR 反應體系見(jiàn)表4。反應體系中各試劑的量可根據具體情況或不同的反應總體積進(jìn)行適當調整�？刹捎蒙唐坊腞T-PCR 試劑盒。

以諾如病毒RNA 為陽(yáng)性對照，以不含有諾如病毒的樣品RNA 作為陰性對照，以水代替模板作為空白對照。

替模板作為空白對照。

實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應條件

反應條件為：48℃ 45min；50℃ 2min；95℃ 10min；95℃ 15 s，56℃ 1 min，45 個(gè)循環(huán)。

注：不同儀器可根據儀器要求將反應參數作適當調整。