蠟樣芽胞桿菌的確證實(shí)驗

染色鏡檢

挑取純培養的單個(gè)菌落，革蘭氏染色鏡檢。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽(yáng)性芽胞桿菌，大小為（1μm～1.3μm）×（3μm～5μm），芽胞呈橢圓形位于菌體中央或偏端，不膨大于菌體，菌體兩端較平整，多呈短鏈或長(cháng)鏈狀排列。

生化鑒定

挑取純培養的單個(gè)菌落，進(jìn)行過(guò)氧化氫酶試驗、動(dòng)力試驗、硝酸鹽還原試驗、酪蛋白分解試驗、溶菌酶耐性試驗、V-P 試驗、葡萄糖利用(厭氧)試驗、根狀生長(cháng)試驗、溶血試驗、蛋白質(zhì)毒素結晶試驗。

溶血試驗

挑取純培養的單個(gè)可疑菌落接種于TSSB 瓊脂平板上，30 ℃±1 ℃培養24h±2 h。蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色，不透明，似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)或完全溶血環(huán)。蘇云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現弱的溶血現象，而多數炭疽芽胞桿菌為不溶血，巨大芽胞桿菌為不溶血。

根狀生長(cháng)試驗

挑取單個(gè)可疑菌落按間隔0.5cm 左右距離劃平行直線(xiàn)于營(yíng)養瓊脂平板上，

30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長(cháng)的特征。蠟樣芽胞桿菌菌株不具形成根狀生長(cháng)的特征。

蛋白質(zhì)毒素結晶試驗

取經(jīng)30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h 并于室溫放置3 d～4 d 的營(yíng)養瓊脂培養物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用30 s 后傾去，再通過(guò)火焰干燥，于載玻片上滴滿(mǎn)0.5％堿性復紅，放火焰上加熱（微見(jiàn)蒸氣，勿使染液沸騰)持續1 min～2 min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色30 s，傾去染液用潔凈自來(lái)水徹底清洗、晾干后鏡檢。觀(guān)察有無(wú)游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結晶體。如發(fā)現游離芽胞形成的不豐富，應再將培養物置室溫2 d～3 d 后進(jìn)行檢查。除蘇云金芽胞桿菌外其它芽胞桿菌不產(chǎn)生蛋白結晶體。

溶菌酶耐性試驗

用接種環(huán)取純菌懸液一環(huán)，接種于溶菌酶肉湯中，36 ℃±1 ℃培養24 h。蠟樣芽胞桿菌在本培養基(含0.001 ％溶菌酶)中能生長(cháng)。如出現陰性反應，應繼續培養24 h。巨大芽胞桿菌不生長(cháng)。

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