噬菌體試驗的基本方法

錄入時(shí)間:2014-2-18 11:04:16 來(lái)源：海博生物

（一）噬菌體的分離和純化

噬菌體的分離

每份未處理的污水樣品取100mL，混合后，經(jīng)36±1℃培養14~24h，通過(guò)孔徑為0.45mm的薄膜濾器，檢查濾液中是否有噬菌體的存在。用斑點(diǎn)試驗法檢查噬菌體。

單斑純化

根據斑點(diǎn)試驗法的結果，估計濾液內噬菌體的數量。將濾液按百倍稀釋法作兩次連續稀釋。即吸取0.02mL，稀釋在2mL肉湯內，使成10－2；再吸取此稀釋液0.02mL，稀釋在2mL肉湯內，使成10－4。

（二）PFU(pfu)和RTD

PFU（pfu）和RTD是噬菌體效價(jià)的計量單位。PFU是噬斑形成單位，表示有感染能力的噬菌體數量，以每毫升內的PFU表示（PFU/ml）。RTD是常規試驗稀釋度，一般以平板上滴加噬菌體的部位剛剛能夠出現或剛剛不能出現完全融合性裂解（CL）所需要的噬菌體稀釋度。

（三）噬菌體的制備

繁殖菌 制備噬菌體用的宿主菌稱(chēng)為繁殖菌。噬菌體的繁殖菌應予以?xún)龈杀４妗?

噬菌體種 制備用的噬菌體種應經(jīng)三次純化后保存。種子管先作PFU測定。

（四）裂解譜和裂解模式

裂解譜是指一種噬菌體的作用范圍。裂解譜的測定是為了確定該噬菌體在種內或屬內的廣譜性，在種外或屬外的交叉反應性。

裂解模式是指幾種噬菌體組成為配套，各種細菌培養物被幾種噬菌體作用而出現的特殊的反應模式，不同的細菌，可呈現不同的反應模式。

裂解譜和裂解模式應使用達到規定效價(jià)的噬菌體進(jìn)行測定。腸桿菌科診斷用噬菌體一般用原液進(jìn)行試驗，效價(jià)要求在103～105RTD或109～1011PFU/ml之間。分型試驗一般用1 RTD的噬菌體。

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