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基本原理：
將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后會(huì )不斷地向紙片周?chē)鷧^域擴散，形成遞減的濃度梯度，在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥却龣z菌的生長(cháng)被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關(guān)，即抑菌圈俞大，MIC俞小。
1. 從瓊脂平板挑取形態(tài)相似的純培養菌落接種肉湯培養基，并于35度培養至濁度達到或超過(guò)0.5麥氏單位，取出用鹽水或肉湯調節菌液濃度至0.5麥氏單位，含菌量約（1－2）×108cfu/ml。也可將菌落直接懸浮于無(wú)菌鹽水或肉湯內，調至0.5麥氏單位，這稱(chēng)為直接菌懸液法。
2. 用無(wú)菌棉拭子浸入調好的菌懸液中，將多于菌懸液在管壁擠出，在M-H瓊脂平皿上劃線(xiàn)，劃滿(mǎn)整個(gè)瓊脂表面，旋轉平皿60°重復劃線(xiàn)共三次，最后一次用拭子涂抹瓊脂邊緣。置室溫3－5分鐘。
3.用紙片分配器或無(wú)菌鑷子取藥敏紙片，貼于平板表面，并用鑷尖輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小于24mm，紙片的中心距平板的邊緣不小于15mm，90mm直徑的平板適宜貼6張藥敏紙片。
4. 將貼好紙片的平板置35度孵育18－24h后，用游標卡尺量取抑菌圈直徑。
結果判斷
根據抑菌圈的大�。ú煌股仄湟志Υ笮〉臉藴什灰恢拢�，判斷為敏感（S），耐藥（R）或中介度（I）。
某些細菌可蔓延生長(cháng)至某種抗生素的抑菌圈內，如磺胺藥抑菌圈內可能有微量的細菌生長(cháng)，可忽略不計，應以外圈為準。
M-H瓊脂培養基
根據商品無(wú)水M-H瓊脂干粉要求制備，高壓后平衡溫度至45－50度時(shí)傾注平皿，使表面呈水平，瓊脂厚度為4mm，pH值應在7.2－7.4間，表面應保持濕潤，但不能有水滴。
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