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B.3.1 每份樣品接種4管酸性肉湯和2管麥芽浸膏湯。每管接種1 mL（g）～2 mL（g）樣品(液體樣品為1 mL～2 mL，固體為1 g～2 g，兩者皆有時(shí)，應各取一半)。培養條件見(jiàn)表B.2。
表B.2 酸性罐藏食品（pH≤4.6）接種的酸性肉湯和麥芽浸膏湯
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培養基 |
管數 |
培養溫度 （℃ ） |
培養時(shí)間（h ） |
|
酸性肉湯 |
2 |
55±1 |
48 |
|
酸性肉湯 |
2 |
30±1 |
96 |
|
麥芽浸膏湯 |
2 |
30±1 |
96 |
B.3.2 經(jīng)過(guò)表B.2中規定的培養條件培養后，記錄每管有無(wú)微生物生長(cháng)。如果沒(méi)有微生物生長(cháng)，則記錄后棄去。
B.3.3 對有微生物生長(cháng)的培養管，取培養后的內容物的直接涂片，革蘭氏染色鏡檢，記錄觀(guān)察到的微生物。
B.3.4 如果在30 ℃培養條件下在酸性肉湯或麥芽浸膏湯中有微生物生長(cháng)，將各陽(yáng)性管分別接種2塊營(yíng)養瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂平板，一塊作需氧培養，另一塊作厭氧培養。
B.3.5 如果在55 ℃培養條件下，酸性肉湯中有微生物生長(cháng)，將各陽(yáng)性管分別接種2塊營(yíng)養瓊脂平板，一塊作需氧培養，另一塊作厭氧培養。對有微生物生長(cháng)的平板進(jìn)行染色涂片鏡檢，并報告鏡檢所見(jiàn)微生物型別。培養程序見(jiàn)圖B.2。
B.3.6 挑取30 ℃需氧培養的營(yíng)養瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂平板中的單個(gè)菌落，接種營(yíng)養瓊脂小斜面，用于后續的革蘭氏染色鏡檢。同時(shí)接種酸性肉湯或麥芽浸膏湯進(jìn)行純培養。
挑取30 ℃厭氧培養的營(yíng)養瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂平板中的單個(gè)菌落，接種酸性肉湯或麥芽浸膏湯進(jìn)行純培養。
挑取55 ℃需氧培養的營(yíng)養瓊脂平板中的單個(gè)菌落，接種營(yíng)養瓊脂小斜面，用于后續的革蘭氏染色鏡檢。同時(shí)接種酸性肉湯進(jìn)行純培養。
挑取55 ℃厭氧培養的營(yíng)養瓊脂平板中的單個(gè)菌落，接種酸性肉湯進(jìn)行純培養。
B.3.7 挑取營(yíng)養瓊脂小斜面中的培養物涂片鏡檢。挑取30 ℃厭氧培養的酸性肉湯或麥芽浸膏湯培養物和55 ℃厭氧培養的酸性肉湯培養物涂片鏡檢。
B.3.8 將30 ℃需氧培養的純培養物接種于營(yíng)養瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂平板中進(jìn)行厭氧培養，將30 ℃厭氧培養的純培養物接種于營(yíng)養瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂平板中進(jìn)行需氧培養，將55 ℃需氧培養的純培養物接種于營(yíng)養瓊脂中進(jìn)行厭氧培養，將55 ℃厭氧培養的純培養物接種于營(yíng)養瓊脂中進(jìn)行需氧培養，以鑒別是否為兼性厭氧菌。
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