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定性檢測
將5.1.3制備的1:10樣品勻液于36℃±1℃培養8 h~18 h
定量檢測
用無(wú)菌吸管吸取1:10樣品勻液1 mL，注入含有9 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內，振搖 試管混勻，制備1:100的樣品勻液。
另取1 mL無(wú)菌吸管，按5.2.2.1操作程序，依次制備10倍系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋一次，換用一支1 mL無(wú)菌吸管。
根據對檢樣污染情況的估計，選擇3個(gè)適宜的連續稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3支含有9 mL 3% 氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1 mL置36℃±1℃恒溫箱內，培養8 h〜18 h
分離
對所有顯示生長(cháng)的增菌液，用接種環(huán)在距離液面以下1 cm內沾取一環(huán)增菌液，于TCBS平板或 弧菌顯色培養基平板上劃線(xiàn)分離。一支試管劃線(xiàn)一塊平板。于36±1℃培養18 h〜24 h
典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類(lèi)似 口香糖的質(zhì)感，直徑2 mm〜3 mm。從培養箱取出TCBS平板后，應盡快（不超過(guò)1 h)挑取菌落或標記 要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養基上的特征按照產(chǎn)品說(shuō)明進(jìn)行判定。
純培養
挑取3個(gè)或以上可疑菌落，劃線(xiàn)接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，36℃±1℃培養18 h〜24h
氧化酶試驗：挑選純培養的單個(gè)菌落進(jìn)行氧化酶試驗，副溶血性弧菌為氧化酶陽(yáng)性。
涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢觀(guān)察形態(tài)。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈
棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無(wú)芽胞，有鞭毛。
挑取純培養的單個(gè)可疑菌落，轉種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層，36℃±1℃培養24 h 觀(guān)察結果。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應為底層變黃不變黑，無(wú)氣泡，斜面顏色不變 或紅色加深，有動(dòng)力。
嗜鹽性試驗：挑取純培養的單個(gè)可疑菌落，分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰 胨水，36℃±1℃培養24 h，觀(guān)察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無(wú)氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不 生長(cháng)或微弱生長(cháng)，在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長(cháng)旺盛。
確定鑒定
取純培養物分別接種含3%氯化鈉的甘露醇試驗培養基、賴(lài)氨酸脫羧酶試驗培養基、MR-VP培養基， 36℃±1℃培養24 h~48 h后觀(guān)察結果；3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養物進(jìn)行ONPG試驗可選擇生化 鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統。
