熒光顯微鏡種類(lèi)與功能

熒光顯微鏡

熒光是由一定波長(cháng)的光被特定物質(zhì)吸收后，發(fā)射出 另一種具有較長(cháng)波長(cháng)的光而產(chǎn)生 的一種現象。這種能重新發(fā)射光的物質(zhì)稱(chēng)為熒光團。一些天然的生物物質(zhì)(如葉綠素）都 有熒光現象,被稱(chēng)為自發(fā)熒光。用于微生物顯微鏡觀(guān)察的樣品常用熒光染色物質(zhì)(或稱(chēng)為 “熒光染料”)染色。使用特殊的波長(cháng)轉換裝置，可以在熒光染料被紫外光照射吋,發(fā)出可 見(jiàn)光譜范圍內的光。這類(lèi)染料有吖啶橙、熒光素異硫氰酸鹽和酸性品紅等。熒光燃料被 激發(fā)后發(fā)射的光顯示特殊的波峰值。吖啶橙是一種異染性染料,是單體熒光綠(波長(cháng)約 525nm)和熒光紅染料分子結合后的產(chǎn)物。這種產(chǎn)物遇到RNA時(shí)染料之 間發(fā)生交互作用產(chǎn)生紅色熒光;但遇到DNA時(shí)，則染料之間的交互作用喪失，而產(chǎn)生綠 色熒光。

熒光顯微鏡的光源可以是鹵素石英燈，高壓汞蒸氣燈或氙弧光燈。 可以將熒光與抗血淸結合進(jìn)行免疫熒光染色來(lái)檢測特殊的菌種。檢測寄主組織中的 特異性病原菌時(shí)，就可以采用這種檢測技術(shù)

發(fā)射紫外光的熒光顯微鏡

因為玻璃能吸收紫外線(xiàn)，所以這種顯微鏡的聚光鏡系統要用石英制造。物鏡和目鏡可以用普通玻璃制造，因為它們只用于觀(guān)察樣品發(fā)出的可見(jiàn)光。但是需要在光路h安裝 斜棱鏡紫外濾光片以保護眼睛，還應在顯微鏡載物臺前安裝紫外濾光屏以防止紫外光 散射。

育接表面熒光顯微鏡

在表面熒光顯微鏡中，激發(fā)光直接通過(guò)R鏡系統從上部照射到樣品上,光路應該在聚 焦樣品的同吋,也能使激發(fā)光聚焦。

這種顯微鏡操作方法與膜過(guò)濾結合有特殊的用途。直接表面熒光膜技術(shù)(DEFT)的 發(fā)展始于對末加工奶(Pettipher等，1980)和熱處理奶的快 速細菌計數r這種方法的最卨靈敏度能達到10³〜10⁴個(gè)/g。

膜過(guò)濾檢測方法已經(jīng)成熟應用于液體或經(jīng)過(guò)適當處理后能通過(guò)濾膜的樣品。例如， 用解蛋白酶將牛奶中的牛體細胞分解，并用表面活性劑打碎牛奶中的臘肪小球，就可以使 用這種技術(shù)進(jìn)行牛奶中細菌的檢測。這種方法也可以用于檢測其他種類(lèi)的食品。

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