實(shí)驗室使用商品化培養基和試劑的質(zhì)量控制的測試方法(GB4789.28-2013)

6.2實(shí)驗室使用商品化培養基和試劑的質(zhì)量控制的測試方法

6.2.1 非選擇性分離和計數固體培養基的半定量測試方法

6.2.1.1平板的制備與保存

按照6.1.1.1中要求進(jìn)行。

6.2.1.2工作菌懸液的制備

將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯培養過(guò)夜作為工作菌懸液。

6.2.1.3 接種  

用1 μL接種環(huán)進(jìn)行平板劃線(xiàn)（如圖2)。A區用接種環(huán)按0.5 cm的間隔劃4條平行線(xiàn)，按同樣的方法 在B區和C區劃線(xiàn)，最后在D區內劃一條連續的曲線(xiàn)。同時(shí)接種兩個(gè)平板，劃線(xiàn)時(shí)可在培養基下面放一 個(gè)模板圖，并按標準規定的培養條件培養平板。

              圖2目標菌半定量劃線(xiàn)法接種模式圖

操作時(shí)用接種環(huán)而不用接種針，接種環(huán)應完全浸入培養基中。取一滿(mǎn)環(huán)接種物，將接種環(huán)接觸容 器邊緣3次可去除多余的液體。劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)與瓊脂平面的角度應為20°〜30°。接種環(huán)壓在瓊脂表 面的壓力和劃線(xiàn)速度前后一致，整個(gè)劃線(xiàn)應快速連續，移取液體培養物時(shí)應將接種環(huán)伸入培養液下部 分以防止環(huán)上產(chǎn)生氣泡或泡沫。

通常用同一個(gè)接種環(huán)對A〜D區進(jìn)行劃線(xiàn)，操作過(guò)程不需要對接種環(huán)滅菌。但為了得到低生長(cháng)指數 G，在接種不同部分時(shí)應更換接種環(huán)或對其滅菌。

6.2.1.4 計算

培養后，評價(jià)菌落的形狀、大小和生長(cháng)密度，并計算生長(cháng)指數G每條有比較稠密菌落生長(cháng)的劃 線(xiàn)則G為1，每個(gè)培養皿上G最大為16如果僅一半的線(xiàn)有稠密菌落生長(cháng)，則G為0.5如果劃線(xiàn)上沒(méi)有 菌落生長(cháng)、生長(cháng)量少于劃線(xiàn)的一半或菌落生長(cháng)微弱，則G為0記錄每個(gè)平板的得分總和便得到G如， 菌落在A(yíng)區和B區全部生長(cháng)，而在C區有一半線(xiàn)生長(cháng)，則G為10

6.2.1.5 結果解釋

目標菌在培養基上應呈現典型的生長(cháng)。目標菌的生長(cháng)指數G大于或等于6時(shí)，培養基可以接受。非選擇培養基的G值通常較高。

6.2.2選擇性分離和計數固體培養基的半定量測試方法

6.2.2. 1目標菌半定量測試方法

按照6.2.1中要求進(jìn)行。

6.2.2.2非目標菌(選擇性）半定量測試方法

按照6.1.2.2中要求進(jìn)行。

6.2.3非選擇性增菌培養基、選擇性增菌培養基和選擇性液體計數培養基的定性測試方法

6.2.3.1 培養基的制備

將培養基分裝試管，每管10 mL

6.2.3.2 工作菌懸液的制備

將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯培養過(guò)夜，進(jìn)行10倍系列稀釋至10-3，或采用其他方法,制備 成105 CFU/mL〜107 CFU/mL的菌懸液作為工作菌懸液。

6.2.3.3 接種

用1μL接種環(huán)取一環(huán)工作菌懸液直接接種到用于性能測試的液體培養基中，按適合的培養時(shí)間和 溫度進(jìn)行培養。

6.2.3.4 結果解釋

用目測的濁度值(如0〜2)評估培養基：

—0表示無(wú)混濁；

—1表示很輕微的混濁；

—2表示嚴重的混濁。

目標菌的濁度值應為2，非目標菌的濁度值應為0或1

有時(shí)可以觀(guān)察到微生物生長(cháng)后聚集成細胞團，沉積在試管或瓶子底部，發(fā)生這種情況時(shí)，小心振 蕩試管后再進(jìn)行觀(guān)察。選擇性液體計數培養基目標菌應有產(chǎn)氣現象，非目標菌無(wú)產(chǎn)氣現象。

6.2.4懸浮培養基和運輸培養基的定性測試方法

6.2.4.1 培養基的制備

6.2.4.2 按照6.1.6.1中要求進(jìn)行。

6.2.4.3 工作菌懸液的制備

將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯培養過(guò)夜作為工作菌懸液。

6.2.4.4 接種

用1 μL接種環(huán)取一環(huán)工作菌懸液直接接種到裝有待測培養基的試管中,混勻后，立即用10μL接種 環(huán)取一環(huán)工作菌培養物劃平行線(xiàn)接種平板，按標準方法中規定的培養時(shí)間和溫度培養；

剩余已接種菌液的待測培養基置20~25℃放置45 min后，再用10 μL接種環(huán)取一環(huán)工作菌培養 物劃平行線(xiàn)接種平板，按標準方法中規定的培養時(shí)間和溫度培養。如保存條件有特殊要求的待測培養 基，參照附錄G培養基質(zhì)量控制標準要求放置或培養后再進(jìn)行劃線(xiàn)接種。

6.2.4.5 結果觀(guān)察與解釋

接種前后平板上目標菌的生長(cháng)情況應均為良好。

6.2.5 Mueller-Hinton血瓊脂的測試方法

按照6.1.7中要求進(jìn)行。

6.2.6 鑒定培養基的測試方法

按照6.1.8中要求進(jìn)行。

6.2.7 實(shí)驗試劑的測試方法

按照6.1.9中要求進(jìn)行。
 

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