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①吸取5mL充分混勻的樣品，分別加入2個(gè)標記好的、無(wú)茵帶橡皮塞的試管中，用 無(wú)菌的無(wú)抗生素奶加至10ml
②每個(gè)試管加入0.2mL含量為1000IU/mL的青霉素溶液。
③毎個(gè)試管中各加ImL嗜熱鏈球菌培養物（首先將等量的18h菌體培養物和滅菌 的無(wú)抗生素奶混合）。
④倒置混合,在(44±0.5℃）的水浴中培養1.5h。
⑤毎個(gè)試管中加人lmL 1%的TTC溶液，將試管翻轉混勻，在44℃再培養1h
⑥與對照管比較，檢查樣品受抑制的情況。無(wú)抗生素奶對照管為深粉紅色；當測試 菌體被完全抑制時(shí)，測試管顏色與用蒸餾水代替TTC的對照管顏色相同,若含有青霉素 的試管顏色發(fā)生變化，證明樣品中存在青霉素。
⑦為便于比較和檢測培養物的敏感性，應使用加人已知濃度青霉素的奶液進(jìn)行試驗 [耐熱鏈球苘在0.01單位/mL的青霉素奶液中產(chǎn)生粉紅色，在0.02單位/mL的青霉素的 奶液中則宂全被抑制（即無(wú)粉紅色用系列稀釋的樣品管與加有已知濃度青霉素的標 準無(wú)菌乳的系列管對照，即可得到檢測樣品中青霉索的含量
⑧所有假陽(yáng)性樣品應在取樣36h之內重新檢測。敏感菌株完全被抑制的樣品的確 證實(shí)驗是失敗的。用加熱至95℃的一組對照系列梯度試驗可區分抗生素和熱敏抑制物
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