①在不含抗生素的奶中按所需濃度加人青霉素溶液,使對照中抗生素濃度與測試的 檢出限制水平一致。以此作為對照管兄外,檢出限還取決于所用菌株的敏感性。使用 枯草芽孢桿菌時(shí),對照管中培養基青霉素的含量為0.05單位/mL;使用嗜熱脂昉芽孢桿 菌(熱乳芽孢桿菌)吋,育霉素含量為0.02單位/mL,
②在40~50℃吋,將lmL處于指數生長(cháng)期的營(yíng)養肉湯培養物加人5mL熔化的營(yíng)養 瓊脂培養基中,然后倒人培養皿,置于橾作臺上使之凝固,按要求標記底板。
③使用潔凈干燥的鑷子,將一片無(wú)菌空白抗生素紙片(直徑13mm,Difco)浸入充分 混合的樣品中,控掉多余奶液,將紙片放在平板中合適的位置,沖洗,擦干鑷子,進(jìn)行對照 和其他樣品的測試。
④將平皿置于適當的培養溫度(30℃培養枯草芽孢桿菌或50℃培養嗜熱脂肪芽孢 桿菌).直到生出菌落或培養至規定的時(shí)間。
⑤檢查平板,將樣品的抑菌圏直徑與對照進(jìn)行比較,當樣品的抑菌圈直徑小于對照 時(shí),樣品合袼;當樣品的抑菌圈直徑等于或大于對照抑菌圏直徑吋,且經(jīng)內酰胺酶處 理后樣品的抑菌圈直徑小于未用β-內酰胺酶處理的樣品抑菌圏直徑時(shí),樣品中含有 內酰胺類(lèi)抗生素。當樣品抑菌圏等于或大于對照時(shí),用內酰胺處理后樣品抑菌圏的 大小不變,則應將樣品加熱,破壞樣品中的其他抑制物質(zhì),然后再次檢測(或將未經(jīng)加熱和 加熱的樣品同時(shí)檢測)。若樣品中抑制物濃度等于或大于對照濃度時(shí),試驗失敗。
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