大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌的多管技術(shù)計數

根據是否分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣可以檢測下文介紹的培養基中是否存在大腸菌類(lèi)細菌。 但因為許多食品中含有大量其他的碳水化合物(如蔗糖、葡萄糖和果糖），當高濃度的食品 混人培養基后，培養時(shí)可能會(huì )出現假陽(yáng)性結果，這一點(diǎn)應引起重視。

培養溫度是一個(gè)有爭議的問(wèn)題，一般使用30〜37t，但在這一溫度范圍內，培養溫度 越低，計數結果越髙。

1月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯在30℃或35℃或37℃培養（ISO4831:1991)

無(wú)菌移取lmL均質(zhì)好的樣品懸液加人盛有月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯 的試管中,共移取3~5管。檢測低污染食品時(shí)，取10mL或100mL最低稀釋度的樣品懸 液加到等體積的培養基中，每個(gè)稀釋度需加3管或5管。

分別在30℃（或37℃）培養，24h和48h后檢查生長(cháng)和產(chǎn)氣情況(產(chǎn)酸的情況通 過(guò)加在試管中的pH指示劑進(jìn)行檢測。當發(fā)酵管產(chǎn)酸且產(chǎn)生足夠的氣體時(shí)(即發(fā)酵管液 面與外管液而平行），即為“可疑陽(yáng)性”反應�？梢申�(yáng)性結果還包栝發(fā)酵管產(chǎn)生少量的氣 體，但帶蓋試管液而上有氣泡冒出的情況。在常規檢測中，試管產(chǎn)氣即可判定為陽(yáng)性結 果，而不再需要檢查產(chǎn)酸情況。

可疑陽(yáng)性管需要轉接2 — 3環(huán)接種物到亮綠乳糖膽鹽肉湯中進(jìn)行確認。將轉接試管 在35℃繼續培養48h產(chǎn)氣(判斷標準如上)者即為陽(yáng)性結果。比較每一梯度的陽(yáng)性管和 陰性管數，通過(guò)最近似值表查得可疑大腸菌群和最終確認后大腸菌群的數值。

從可疑陽(yáng)性管中轉接培養物到EC培養基中，在(45.5 ±0.2)℃培養，可檢測糞大腸 菌群

.2亮綠乳糖膽鹽肉湯

也可用多管技術(shù)法替代上述方法進(jìn)行大腸菌群的檢驗：即接種亮綠乳糖膽鹽肉湯 試管，在30℃（BS4285：3.7,1987）35℃或37℃培養，通過(guò)產(chǎn)氣來(lái)判定可疑陽(yáng) 性結果。用接種環(huán)將產(chǎn)氣管中的培養物劃線(xiàn)轉接到Endo瓊脂平板、紫紅旭鹽乳糖瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板上，可驗證陽(yáng)性結杲。

3麥康凱肉湯

另一種方法是用樣品稀釋液接種麥康凱肉湯后，在30℃培養48h(大腸產(chǎn) 氣菌計數)或37℃培養48h(大腸菌群計數)�？梢申�(yáng)性管(產(chǎn)酸、產(chǎn)氣)轉接到亮綠乳糖膽鹽 肉湯中或在麥康凱瓊脂平板上劃線(xiàn)進(jìn)行驗證。

從可疑陽(yáng)性管轉接接種物到亮綠乳糖膽鹽肉湯中，并在(44±0.1)℃培養，可檢測糞 大腸菌群

4糞大腸菌群和大腸桿菌的多管技術(shù)計數法

大腸菌群的驗證結果能夠為糞大腸菌群的計數提供補充信息，糞大腸菌群可在44- 45℃分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣（大多數情況下，把它等效于大腸桿菌）。這個(gè)實(shí)驗被稱(chēng)作改良 Eijkman 試驗 0

可疑陽(yáng)性管接種物可轉接到以下任一培養基中：

(1) EC 培養基，在 44.5℃培養24h(AOAO,1995

(2) 亮綠乳糖膽鹽肉湯，在(44.0±0.1)℃培養24h

在改良的Eijkman試驗中通常建議將月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯和麥康 凱肉湯綜合起來(lái)使用。轉接前試管應先將培養基加熱到培養 源度（這個(gè)試驗以前是用麥康凱肉湯在44~45℃培養、現在已被上面列出的兩種培養基 代替了）。

I型大腸桿歯在44~45℃下為吲哚試驗陽(yáng)性，因此Eijkman試驗可將轉接的蛋白胨 水試管在較高溫度培養24h，然后檢測吲哚的產(chǎn)生。大腸桿菌的驗證實(shí)驗 IMViC(即吲哚試驗、甲基紅試驗、V-P試驗和檸檬酸鹽利用試驗）比較費時(shí)間：因為細菌 要在35~37℃培養，苜先必須先將適當的肉湯培養物在固體培養基（該培養基有特異性 但沒(méi)有選擇性)上劃線(xiàn)，以獲得純菌種。

另一種速度更快的大腸桿菌計數方法是將原始樣品和稀釋液轉接到培養基中，在 30℃培養4h，然后轉移到(44,0±0.2)℃水浴巾培養18-20h:

注意：正如前文所述,大腸桿菌中的一些致病菌株(特別是EIEC和VTEC菌株）這 些試驗呈陰性。

上一篇：總腸道菌族檢測

下一篇：發(fā)酵乳中細菌的檢測