沉淀素試驗

錄入時(shí)間:2013-12-19 10:04:42 來(lái)源：海博生物

Lancefield方法中鏈球菌族抗原溶液的制備

(1) 在50mL酵母葡萄糖Lemco肉湯培養基中接種鏈球菌，過(guò)夜培養；

(2)將肉湯培養基離心，棄去上清液;.

(3) 在細菌沉淀中加人2mL(0.05mol/L的,含有8.5g/LNaCl的HC1溶液，用移液管將懸浮液轉移到小試管中；

(4) 將試管在沸水浴中加熱l0min

(5) 用流水冷卻；

(6) 滴加1滴0.04%的酚紅，液體應由紅變黃；

(7) 逐滴加人0.3mol/L NaOH溶液至液體呈堿性（出現紅色），然后再逐滴加入0.lmol/L HCl直至液體呈中性(顏色為鮭粉色）；

(8)離心用巴斯德移液管轉移上清液至另一試管中，棄去沉淀，該上清液包含有需要使用的抗原，如果抗原提取液需要保存，可加人0.5%的石炭酸，并存放于冰箱中。

13.6.2沉淀環(huán)試驗

該試驗為沉淀素試驗中最常用的方法，通常用來(lái)檢測鏈球菌。用1:10〜1:107的抗原10倍稀釋液可以進(jìn)行粗略定量試驗。

操作步驟

(1) 在6mm*50mm試管中加入O.lmL抗體：

(2) 在抗體上加人0.1mL已制備好的抗原或系列抗原稀釋液。小心操作，以使兩溶液之間形成清晰的界面。用微量巴斯德移液管，將管口正好抵住抗體表面上部的試管壁，以使抗原溶液流向抗體表面；

(3) 以同樣方式做鹽水-抗血清對照和抗原-陽(yáng)性血清對照。

(4) 結果：30min內試劑界面出現白色沉淀,即為陽(yáng)性反應。

若實(shí)驗經(jīng)費較少，需減少試劑用量，可以用毛細管代替6_x 50mm試管，毛細管可以垂直插人橡皮泥中。

如果用系列抗原稀釋液做沉淀素試驗,通常會(huì )有一根試管比所有其他試管的沉淀出現的都早，那么這根試管抗原對抗體的稀釋比例為最佳比例。