載玻片凝集試驗

將細胞的抗原和單一的抗體混合后會(huì )發(fā)生凝集現象�？乖�和抗體反應的結果是細菌細胞凝結成塊，形成絮狀物或密集的微粒。對于腸桿菌科細菌，如果是“H”型抗原（即鞭 毛抗原)和它的單一抗體發(fā)生的反應，形成絮狀物；如抗原是“0”型抗原（即菌體抗原），則 形成更為密集的微粒凝塊。

市售的抗體有兩種類(lèi)：能與特定菌屬或幾種血清發(fā)生反應的多價(jià)抗體,適用于做 初步的檢測；特定的單克隆抗體，用于鑒別菌種特定的血清型。瓶裝的抗體應置于4~7℃的暗處存放，在這種存放條件，它們的使用有效期要比標示的時(shí)間長(cháng)幾個(gè)月。但需 要定期地對抗體的實(shí)際效價(jià)(或濃度)進(jìn)行測定。

13.2.1載玻片凝集試驗

操作步驟

(1) 取一塊干凈、去油脂的載玻片，用蠟筆將其分成3部分，并分別標上“H”O’和 "C” (對照）;

(2) 在標有“C”的部分加上1〜2菌環(huán)生理鹽水；

(3) 在標有“H”的部分加上】滴用甲醛處理過(guò)的細菌懸浮液(見(jiàn)下），在標有“0”的部 分加1滴經(jīng)加熱處理過(guò)的細菌懸浮液(見(jiàn)下）；

(4) 在標有“H”部分再加人1環(huán)沒(méi)有稀釋的多價(jià)“評’抗血清，使其與細菌懸浮液混合；

(5) 在標有“O”的部分再加入1環(huán)沒(méi)有稀釋的多價(jià)“0”抗血清，使其與細菌懸浮液 混合；

(6) 輕輕地前后晃動(dòng)載玻片，在暗背景下觀(guān)察3min，如發(fā)生凝集反應，通常在30S內 會(huì )有細菌凝塊形成，對照部分不應有任何變化。

注意：每一次都必須先將接種環(huán)灼燒，冷卻后再轉移細菌懸浮液,這一操作步驟很 重要

對于可疑的沙門(mén)氏菌，推薦使用多價(jià)的沙門(mén)氏菌“O”抗體載玻片凝集試驗驗征。如 為陰性反應，用1~2組多價(jià)“H"抗體重復試驗。如依舊為陰性反應，再用傷寒沙門(mén)氏菌 的“Vi”抗體重復試驗。如需對發(fā)生凝集反應的菌種做進(jìn)一步的鑒別，可使用 單一的血清因子。Harvey和Price(1961，1974)介紹過(guò)一個(gè)鑒別沙門(mén)氏菌H-抗原組的簡(jiǎn) 單方法，如果需要對一些特殊的血清進(jìn)行鑒別可使用該方法。

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