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選用適當的培養基并在適當的培養條件下時(shí)以對樣品中的活菌或菌落（如菌落形成 單位)計數。水溶性或可在水中制成懸浮液的®體樣品（如土樣、面粉、奶粉、糖），可以在 稱(chēng)取樣品后，加入無(wú)菌水配制成稀釋液，并按以下介紹的方法計數;有些固體物質(zhì)(包括一些食品，如奶酪、肉等)需要在無(wú)菌水中浸泡后得到懸浮液一般使用的稀釋 液包括蛋白胨水稀釋液，蛋白胨鹽稀釋液和25%的Ringer氏溶液。
在平皿屮加人已知量的懸浮液或其稀釋液，倒入融化的瓊脂。瓊脂凝固置于溫箱中培養后計數。應該選擇平板菌落數小于300的平板計數。需要時(shí)可以采用雙平行或三平 行平板。
下面介紹關(guān)丁液體樣品的標準計數方法。對于不同的物質(zhì)或產(chǎn)品，操作步驟有所不同。
樣品的混合
在進(jìn)一步檢測前，必須將樣品充分混勻。對于液體樣品，如果瓶中的液體沒(méi)有完全充滿(mǎn)，可以在30cm的范圍內振動(dòng)瓶子25次混勻。如果樣品的瓶子是滿(mǎn)的，快速將瓶子翻 轉M次徹底浞勻,然后倒出約1/4的內容物，再按上述方法搖動(dòng)25次。
稀釋液的制備
(1) 取一支lmL的吹吸移液管T將移液管的尖部垂直插人樣品液面下不到3cm的位 置，采用安全移液方式，吸取到lmL刻度后吹掉，反復1U次。吸取lniL液體，移液管尖 貼仵瓶頸，使管外壁的液體流下。將移液管置于第一管稀釋液中，移液管尖部靠在試管內壁，稀釋液液面以h 2〜處，讓移液管中的液體流出，移液管不能接觸稀釋液，將移液管靜置知，使殘余的液滴全部流出，并用吹吸球輕輕吹出管內液體。用完的移液管放入 裝有滅菌液的容器中^第一個(gè)試管標記為1/10或1CT、
(2) 取一只新的移液管，放人第一個(gè)稀釋度的試管屮，吸取到約lmL的刻度后放出， 反復吹吸10次使內容物混勻(或在手中轉動(dòng)試管）。試管的尖部不要低于液面2〜3cm。 然后移取丨mL稀釋液到第二管稀釋液中，如上所述，使移液管中液體流出。同樣，如上步 所述，移液管放人裝有滅闌液的容器屮。并標記稀釋試管為1/】00或10_2。
(3) 取另一只新的吸管和稀釋管，采用同樣的方法稀釋到1/1000或10人
(4) 根據預測樣品中可能存在的細菌數，采用相同的操作步驟可以進(jìn)一步稀釋到 10 4、川_5等需要的稀釋度。假定按多數細菌的體積大于l^m3計箅，則細菌團的計數不 可能大于1012/mL。腐敗的肉類(lèi)表面的細菌數約為lOVcm2，河水的細菌數約為104〜 106/mL。
平板的制備
(2) 使用同一支吸管從10 2稀釋度的試管中吸取lmL稀釋液移取到平板中，注意 在移取前先吹吸液體3次清洗移液管內部并將稀釋液混勻。
(3) 同樣的方法從10 —和原液中移取lmL液體到平皿中：
(4) 另外一種更快的方法是在稀釋的同時(shí)移取溶液。即通過(guò)吹吸10次將液體混勻 后，移取lmL液體到平皿中，然后再移取lmL到另一個(gè)有稀釋液的試管中。
倒平板
(1) 每個(gè)平板中加人10mL融化的瓊脂培養基并迅速往復搖動(dòng)和轉圈晃動(dòng)5〜l(hs 使培養基與接種物充分混合。嚴格的操作方法是往復搖動(dòng)5次，順時(shí)針轉動(dòng)5次，與第一 次運動(dòng)方叼垂直搖動(dòng)5次，逆時(shí)針轉動(dòng)5次。用這種方法能保證樣品充分分散，操作時(shí)注 意不要讓瓊脂濺到平皿的蓋上。
注意：從稀釋樣品至倒培養基的時(shí)間不能超過(guò)30min(—般為15〜30min)，因為長(cháng)時(shí) 問(wèn)放置可能會(huì )造成稀釋液中懸浮的細菌死亡、增長(cháng)或菌落的分離。
(2) 待平板冷卻,翻轉后置于適當的溫度培養。注意平皿的標識必須正確�；c(diǎn)時(shí) 間研究如何標識平皿很有必要。使用代碼標識可以避免混淆，但過(guò)多的書(shū)寫(xiě)標記會(huì )浪費時(shí)間，可以使用不同顏色的記號筆以減少e錄。為r盡快達到溫度平衡,在培養箱屮疊放 的平板不能起過(guò)六個(gè)。
注意：在整個(gè)操作過(guò)程中要避免污染。移液管使用前快速通過(guò)酒精燈外焰灼燒；樣 品瓶或試管在拿掉塞子及重新蓋上前，都要將W部在火焰上灼燒；平皿蓋開(kāi)口盡量小，只 要能倒人培養基即可；倒瓊脂培養基前，將瓶壁或試管壁擦干；拿掉塞子后（或在再次蓋上 瓶塞之前)要灼燒瓶頸部。
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