單核細胞增生李斯特菌的增菌檢測方法

(1)在225mL的Fraser基礎肉湯中分別加入2.25mL無(wú)菌氯化鋰溶液、0J3mL尤菌萘啶酮酸鈉鹽溶液、1.12mL無(wú)菌吖啶黃溶液和2.25mL無(wú)菌檸檬酸鐵銨溶液(詳見(jiàn)附 錄1中培養基及其無(wú)菌添加物）。混合后制成50%的Fraser肉湯，加人樣品后置于30C 培養Mh,進(jìn)行初增菌。

(2)  ①將一環(huán)增菌培養物劃線(xiàn)于牛津瓊脂上，另取一環(huán)接種于PALCAM瓊脂上平板在35℃或37℃培養48h(牛津瓊脂平板在需氧條件下培養，PALCAM瓊脂平板在第 10.1中描述的微生物需氧條件下培養）。

②將0.1mL增菌肉湯轉接到裝有10mL Freser基礎肉揚的試管中，置于35℃或 37℃培養48h，進(jìn)行二次增菌。

(3)  按(2)①中的方法轉接二次增菌液于牛津瓊脂平板和PALCAM平板。

李斯特菌屬快速篩選試驗

使用適當的ELISA試劑盒可以對初次和二次增菌液進(jìn)行快速檢測，從而對單核細胞增生李斯特菌進(jìn)行快速篩(如TECRA李斯特菌可視免疫測定法)。

李斯特菌的鑒定和驗證

(1)  李斯特菌能水解七葉苷，除格氏李斯特菌外，其他李斯特菌均不能分解甘露醇產(chǎn)酸。在牛津瓊脂平板上，李斯特菌菌落直徑為2〜3mm，帶有黑褐色或黑色暈輪(七葉苷水解所形成），菌落的中心經(jīng)常是下凹的；在PALCAM瓊脂匕李斯特菌菌落直徑為 1.5〜lnm,綠色并帶有黑色的暈輪(或菌落中心為黑色)。

(2)驗證時(shí)，挑取5個(gè)典型的菌落，每個(gè)菌落劃線(xiàn)接種到胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSYEA)上，置于MT：或37T：需氧培養24〜48h,分離平板上的單個(gè)菌落以確保菌株的 純度。

(3) 檢查TSYEA平板上生氏的單個(gè)菌落,使用亨利描述的菌落特征進(jìn)行分離亨利認為李斯特菌在TYS平板上生成細小的、半透明的菌落，菌落呈藍色、藍綠 色或藍灰色，菌落表面為細小的顆粒狀,類(lèi)似于粗糙的磨砂玻璃。

從TSYES平板上挑取一個(gè)單個(gè)的菌落，分別接種于胰蛋白胨大豆酵母浸膏肉湯 (TSYEB)試管和胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSYEA)斜面上，25C培養18〜24h。

(4)  ①ffl lSYEK肉湯培養物進(jìn)行菌體運動(dòng)試驗和革蘭氏染色。李斯特菌屬呈翻筋斗運動(dòng)，注意與振蕩培養后非致病性李斯特菌的快速直線(xiàn)運動(dòng)進(jìn)行區別。李斯特菌為小的、革蘭氏陽(yáng)性的、無(wú)孢子的短桿菌。

②用TSYEB斜而t：的生長(cháng)物進(jìn)行過(guò)氧化氫酶和氧化酶試驗。李斯特菌過(guò)氧化氫 酶試驗陽(yáng)性，氧化酶試驗陰性o

③用TSYEB培養物接種下列培養基，進(jìn)行驗證和鑒定試驗：

a.  接種D-葡萄糖、D-水楊苷、L-鼠李糖、D-木糖發(fā)酵肉湯(含有溴甲酚紫；見(jiàn)附錄1)，置35℃或37℃培養，每天檢查產(chǎn)酸的情況(生化管由紫色變?yōu)辄S色)。

b.   接種硝酸鹽蛋白胨水，檢查硝酸鹽的產(chǎn)生情況。在35℃或37℃培 養5d。

c.   使用金黃色葡萄球菌和馬紅球菌進(jìn)行CAMP試驗(見(jiàn)11,5.3)。在35℃或37℃ 培養24h。

可選用API李斯特菌試劑盒（HoMMeux)。Mdauchlin發(fā)現該試劑盒能夠很好地鑒 定和區分不同的李斯特菌種。

 結果

李斯特菌均為革蘭氏陽(yáng)性、小而纖細的桿狀菌，過(guò)氧化氡酶試驗呈陽(yáng)性，氧化酶試驗 呈陰性，能分解D-葡萄糖和D-水楊苷產(chǎn)酸，能進(jìn)行翻筋斗狀運動(dòng)。

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