核酸雜交篩選比色法
錄入時(shí)間:2013-11-25 9:22:18
來(lái)源：海博生物
主要利用特異的基因探針對沙門(mén)菌、李斯特菌和大腸桿菌的rRNA進(jìn)行檢測。檢測步驟如下：先設計出與細菌rRNA互補的基因探針，待檢樣經(jīng)過(guò)增菌培養后，溶解細菌并加入帶有標記的探針進(jìn)行液相雜交：如果待檢樣中存在靶細菌rRNA、熒光素標記的檢測探針和多聚脫氧腺嘌呤核苷酸末端捕獲將與目標rRNA序列雜交；此后，把包被多聚脫氧胸腺嘧啶核苷酸的固相載體測桿插入雜交溶液中，利用多聚脫氧腺嘌呤核苷酸與多聚脫氧胸腺嘧啶核苷酸間的堿基配對將雜交核酸捕獲于固體載體中，并將固相載體真培養于過(guò)氧化酶-抗熒光素接合劑中，使探針上的熒光素與結合劑結合；最后，將固相載體置于酶底物-色原溶液中，使過(guò)氧化酶與底物反應，在450nm處測量吸光度值，以確定樣品中是否存在靶細菌。
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