1)原理:將含有定量抗菌藥物的紙片貼在測試菌的瓊脂平板上,紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷地向紙片周?chē)鷶U散,形成遞減的濃度梯度。 在紙片周?chē)梢志鷿舛确秶鷥葴y定菌的生長(cháng)被抑制,從而形成無(wú)菌生長(cháng)的透明圈即抑菌圈。 抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感性。
(2) 制備抗菌藥物紙片 專(zhuān)用藥敏紙片:用加樣或浸泡的方法使每片的藥量達到一定的規定量,冷凍干燥后密封,-20°C保存備用。 (3)配制培養基
水解酪蛋白(Mueller-Hinton,MH)瓊脂是對生長(cháng)較快的需氧和兼性厭氧菌進(jìn)行藥敏試驗的標準培養基,pH7.2-7.4,瓊脂厚度為4mm。
對營(yíng)養要求較高的細菌進(jìn)行藥敏試驗時(shí),應在MH瓊脂中加入相應的營(yíng)養添加劑。 (4)細菌接種
接種物的準備可采用生長(cháng)法或直接菌落懸液法。
為使藥敏試驗的接種濃度標準化,應使用0.5麥氏比濁標準的菌液濃度,制備好的菌液應在15min內接種完畢。
置35℃孵育16-18h后讀取結果,厭氧菌應孵育在含CO2的環(huán)境中,葡萄球菌和腸球菌必須孵育24h,以檢測對苯唑西林和萬(wàn)古霉素的耐藥性。 (5) 結果解釋和報告
用游標卡尺或直尺量取抑菌圈直徑,參照NCCLS標準判斷結果。常分為以下三級:敏感、中度敏感、低度敏感 (6)紙片法藥敏結果的影響因素
培養基的質(zhì)量對結果的準確性有直接影響,如pH、硬度、濕度和深度等; 藥敏紙片的含藥量是影響抑菌圈大小的重要因素; 接種菌量正確與否是影響結果的重要因素之一; 試驗操作質(zhì)量;培養條件和溫度、時(shí)間; 抑菌圈測量工具的精確度;
質(zhì)控菌株本身的藥敏特性是否合格,有無(wú)變異。 (7)質(zhì)量控制
采用標準菌株是進(jìn)行藥敏試驗質(zhì)量控制的主要措施。
常用的臨床藥敏質(zhì)控標準菌株有:金黃色葡萄球菌ATCC25923,大腸桿菌ATCC25922,銅綠假單胞菌ATCC27853 等。
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