基本原理
通過(guò)在支持物（如蓋玻片）上培養貼壁細胞，可以應用抗體檢測細胞表面抗原的表達或進(jìn)行酶細胞化學(xué)以及免疫細胞化學(xué)檢測。該方法的優(yōu)點(diǎn)是細胞貼壁牢固，能夠維持細胞生長(cháng)時(shí)的狀態(tài)。
試劑和設備
細胞懸浮液；
6孔平底組織培養板，或φ60 mm培養皿；
18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片；
含血清培養基（通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素）；
超凈工作臺；
CO2孵箱；
蓋片鑷；
操作步驟
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長(cháng)至覆蓋培養板底部2/3面積時(shí)，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗要點(diǎn)及說(shuō)明
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(cháng)狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過(guò)大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長(cháng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
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