組織和細胞的固定方法

 

固定方法有物理固定和化學(xué)固定兩類(lèi)，物理固定可采用空氣干燥（血涂片）、驟冷（在液氮中迅速冷凍）或微波固定等；化學(xué)固定有浸潤法（immersion method）和灌流法（perfusion method）。灌流法適用于動(dòng)物實(shí)驗中對缺氧敏感的器官，如神經(jīng)系統和胃腸等取材。

 

一、浸潤法

 

浸潤法是組織化學(xué)和免疫 組織化學(xué)常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時(shí)也多用此法。

 

預先需估計固定劑的用量，并在取材前配好固定液，分裝于小容器內，在容器上標記組別和取材時(shí)間。容器內放人記錄組織類(lèi)型的紙條，以便包埋時(shí)辨認。固定液的用量應是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時(shí)間可根據所選固定液和組織類(lèi)型而定。

 

若進(jìn)行酶組織化學(xué)染色，應在4℃短時(shí)間固定，固定時(shí)間長(cháng)會(huì )導致酶活性減弱，甚至消失。

 

二、灌流固定法

 

此法是經(jīng)血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內，使生活的細胞在原位及時(shí)迅速固定，取下組織之后再浸入相同的固定液內繼續固定。

 

灌流固定時(shí)大動(dòng)物多采用輸液方式，將固定液從一側頸總動(dòng)脈或股動(dòng)脈輸入，從另一側切開(kāi)靜脈放血，輸入固定液與放血同時(shí)進(jìn)行。固定液的輸人量因個(gè)體不同而異，即500―2000ml不等。

 

小動(dòng)物多采用心臟主動(dòng)脈灌流，如大鼠和小鼠，在吸人 深度麻醉情況下，打開(kāi)胸腔，縱向切開(kāi)心包膜，并用紗線(xiàn)在動(dòng)脈弓下打一松結，然后用靜脈輸液針從左心室向主動(dòng)脈方向刺人，針尖刺人后，隨即將紗線(xiàn)扎緊固定，勿使其移動(dòng)，再將右心耳剪開(kāi)放血。在灌注固定液前，先用含抗凝劑的37℃生理鹽水灌流，沖洗血管內的血液，防止血液凝固阻塞血管�？鼓齽┏Ｓ酶嗡�，劑量為40mg/L沖洗液。肝臟顏色由鮮紅變?yōu)闇\白色時(shí)，即可灌流固定液，灌注速度為5～10ml/min，應在30分鐘內結束灌注并取材，而后將組織浸入相同的固定液中1～3小時(shí)。灌流固定對組織結構和酶活性保存較好。