動(dòng)物細胞融合

 

細胞融合是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細胞合并成為一個(gè)細胞的過(guò)程。在自然情況下，體內和體外培養的細胞均能發(fā)生自發(fā)融合現象。人工方法誘導細胞融合開(kāi)始于50 年，現在這項技術(shù)已成為研究細胞遺傳、細胞免疫，腫瘤及細胞工程的重要手段。在誘導物（如仙臺病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的細胞發(fā)生凝集，隨后在質(zhì)膜接觸處發(fā)生質(zhì)膜成份的一系列變化，主要是某些化學(xué)鍵的斷裂與重排，最后打通兩質(zhì)膜，形成雙核或多核細胞（此時(shí)稱(chēng)同核體或異核體）。通過(guò)有絲分裂，細胞核便發(fā)生融合，形成雜種細胞。

 

實(shí)驗內容及方法

1. 用注射器取2ml Alsver 液，再從翼下靜脈取雞血2ml，注入試管內，再加6ml Alsver 液，混勻后置4℃冰箱中可備作3—4 天用。

2. 實(shí)驗時(shí)取“1”液1ml 于離心管中，加入4ml 0.85%的NaCl 液，混勻平衡后以1200r/min離心5 分鐘。

3. 去上清液。再重復“2”兩次，最后一次離心10 分鐘。

4. 在沉降血球中加入1mlGKN 液，混勻使之成為細胞懸液。（可加GKN 液調節稀釋使每立方毫米含紅細胞3~4 萬(wàn)個(gè)）。

5. 在“4”液中加入6—8 滴（約0.5ml）50%的PEG 液，迅速混勻，常溫下2~3min 滴片鏡檢。觀(guān)察時(shí)注意不同程度的融合現象。通常分為五個(gè)階段。①兩細胞膜接觸，粘連；②細胞膜形成穿孔；③兩細胞的細胞質(zhì)連通；④通道擴大，兩細胞連成一體；⑤細胞完全合并，形成一個(gè)含有兩個(gè)或多個(gè)核的圓形細胞。

6. 計算融合率。

 

實(shí)驗用品

1. 器具 顯微鏡 離心機 天平 離心管 注射器 細滴管 載片、蓋片

2. 試劑 50%聚乙二醇（PEG）：稱(chēng)取一定量的PEG（MW=4000）放入刻度試管，在酒精燈火或沸水中加熱溶化。待冷至50℃時(shí)，加入等體積并預熱至50℃的GKN 液混勻。

Alsver 液：葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.8g NaCl 0.42g，加重蒸水至100ml。

GKN 液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，NaH2PO·2H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚紅0.01g，溶于1000ml 重蒸水中。

0.85%NaCl 液

3. 材料 一齡公雞靜脈血