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    原代細胞骨架的染色方法



    錄入時(shí)間:2013-9-4 9:15:42 來(lái)源:食品伙伴網(wǎng)

    微絲的顯示方法步驟:
          1.  用PBS液漂洗蓋片培養的原代細胞3次,每次30s;
          2.  用2%的甲醛/PBS液固定原代細胞3min;
          3.  用0.5%的三硝基甲苯/PBS處理3次,每次10min;
          4.  PBS漂洗3次;
          5.  用羅丹明(rhodamine)標記的鬼筆環(huán)肽(phalloidin)(1:10)室溫中反應15min;
          6.  PBS漂洗3次;
          7.  60%甘油+熒光防淬劑封片;
          8.  熒光顯微鏡觀(guān)察;
     
     微管的顯示方法:
          1.  用PBS液漂洗蓋玻片的原代細胞3次,每次30s;
          2.  在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min;
          3.  用PBS液再漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
          4.  投入冷丙酮中(-10—-20℃)7min;
          5.  用PBS漂洗3次,每次1min,最后用濾紙吸干多余的PBS液;
          6.  向直徑6cm的干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體,令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上,覆以皿蓋,于37℃溫箱中放置45min—1h;
          7.  向碟皿內勻速緩慢滴加PBS,令蓋片浮起在液面,用鑷子夾出,按步驟3處理;
          8.  向干凈碟皿中央滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標記的二抗,其后操作按步驟6進(jìn)行;
          9.  按步驟7和3操作;
          10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上,把小蓋片的原代細胞面覆在大蓋片上;
          11. 將蓋片置于熒光顯微鏡下觀(guān)察;

     

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