菌種保存培養基

一、菌種保存培養基

   [配法]

    蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化鈉3g，磷酸氫二鈉2g，瓊脂粉4.5g，蒸餾水1L 。  

將上述成分混合于水中，加熱溶解，調pH至7.4~7.6，分裝試管2/3左右高度，121℃高壓滅菌15min，成為半固體培養基，備用。

   [質(zhì)量控制]

   培養基呈淡黃色半固體狀。大腸埃希菌(ATCC 25922)生長(cháng)良好,動(dòng)力陽(yáng)性；福氏志賀菌(ATCC 12022)生長(cháng)良好,動(dòng)力陰性；金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)生長(cháng)良好,動(dòng)力陰性。

二、增菌培養基

   1.葡萄糖肉湯

[用途]

用于血液增菌。

   [配法]

    蛋白胨(或月示 胨)10g，氯化鈉5g，肉浸液（或心浸液）1L，葡萄糖3g，枸櫞酸鈉3g，5g/L對氨基苯甲酸水溶液10ml，1mol/L硫酸鎂溶液20ml，青霉素酶1000 U。                                         

    將蛋白胨、氯化鈉混合于肉浸液中加熱溶解，再加入葡萄糖、枸櫞酸鈉、對氨苯甲酸及硫酸鎂，繼續煮沸5min，并補足失水，調整pH至7.8。

過(guò)濾分裝，每瓶50ml，高壓滅菌115℃20min后，每瓶加入青霉素酶50 U，經(jīng)無(wú)菌試驗合格后，冷卻備用。

    [用法]

    將采取的血液標本，以無(wú)菌手續注入培養瓶中（血液1ml，培養液10ml），置35℃培養箱內，每天1次取出觀(guān)察結果。如有細菌生長(cháng)，可出現數種不同的表現，應隨時(shí)作分離培養，可選用血瓊脂、伊紅美藍瓊脂及巧克力瓊脂平板等。無(wú)細菌生長(cháng)表現的培養瓶，需連續觀(guān)察7d，仍無(wú)細菌生長(cháng)方可棄去。在觀(guān)察的過(guò)程中，至少應作兩次分離培養。

⑴ 枸櫞酸鈉為抗凝劑，可使血液加入培養基中不凝固。

    ⑵ 對氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺類(lèi)藥物的抑菌作用。

    ⑶ 硫酸鎂主要抑制血液中存在的四環(huán)素、金霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用。

⑷ 本培養基近年來(lái)有許多改良配方，如加入0.3%～0.5%酵母浸膏以增加營(yíng)養；加0.2%核酸刺激細菌生長(cháng)；加0.1%粘液素能被覆于細菌的表面，保護細菌免受抗體破壞；加入聚茴香腦磺酸鈉（SPS）能中和補體的抗藥作用從而提高檢出率。

   2.血液增菌培養基

   [用途]

    血液和骨髓液病原菌的增菌培養。

   [配法]

    蛋白胨10g，氯化鈉5g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏粉3g，枸櫞酸鈉3g，磷酸氫二鉀2g，5g/L對氨基苯甲酸溶液5ml，1mol/L硫酸鎂溶液20ml， 4g/L酚紅溶液6ml，青霉素酶50 U，聚茴香腦磺酸鈉(SPS) 0.3g，蒸餾水1L。   

   將上述成分（除酚紅指示劑、青霉素酶外）混合加熱溶解，校正pH至7.4，再加酚紅，過(guò)濾分裝每瓶30～50ml，經(jīng)121℃滅菌15min和35℃24h無(wú)菌試驗備用。臨用時(shí)每瓶加入1.5～2.5 U青霉素酶。

    傷寒沙門(mén)菌ATCC 50096、白色念珠菌ATCC 10231、化膿性鏈球菌ATCC   19615、肺炎鏈球菌ATCC 6305、金黃色葡萄菌ATCC 25923、銅綠假單胞菌ATCC 27853均生長(cháng)良好。