細菌標本的染色檢查

　　因為在接近中性的環(huán)境中細菌都帶有負電荷，易與帶正電荷的堿性染料結合，故常用堿性苯胺染料如美藍、結晶紫、堿性復紅等染色細菌。

　　（一）常用染料

　　1.堿性染料：電離后顯色離子帶正電荷，易與帶負電荷的被染物結合。由于細菌的等電點(diǎn)在pH2～5之間，在堿性、中性、弱酸性的環(huán)境中細菌均帶負電荷，易與帶正電荷的染料結合而著(zhù)色。常用的染料有堿性復紅、結晶紫、美藍等。

　　2.酸性染料：電離后顯色離子帶負電荷，易與帶正電荷的被染物結合。一般情況下細菌都帶有負電荷故不易著(zhù)色。如果降低菌液的pH使細菌帶正電荷，則可被染色。酸性染料通常用來(lái)染細胞漿，而很少用于細菌的染色。常用的酸性染料有伊紅、剛果紅等。

　　3.復合染料（中性染料）及熒光染料：復合染料是堿性染料和酸性染料的復合物，如瑞氏染料（伊紅美藍）、姬姆薩染料（伊紅天青）等；熒光染料如熒光標記的抗體，熒光素常用異硫氫基熒光素。這些染色常用于某些特殊的染色技術(shù)中。

　　（二）常用的染色方法

　　細菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→染色（初染→媒染→脫色→復染）。

　　1.單染色法：用一種染料將細菌和周?chē)�物體染成同一種顏色。細菌經(jīng)單染色法處理后，可觀(guān)察其形態(tài)、排列、大小及簡(jiǎn)單的結構，但不能顯示各種細菌染色性的差異。

　　2.復染色法：用兩種或兩種以上的染料染色的方法，稱(chēng)為復染色法或鑒別染色法。常用的有革蘭染色法和抗酸染色法。

　�。�1）革蘭染色：本法是細菌學(xué)中最經(jīng)典、最常用的染色方法。除糞便、血液等極少數標本外，絕大多數標本在分離培養之前都要進(jìn)行革蘭染色、鏡檢。

　　意義：①鑒別細菌：通過(guò)革蘭染色將所有細菌分為G⁺菌和G^-菌兩大類(lèi)，可初步識別細菌，縮小范圍，有助于進(jìn)一步鑒定。甚至有時(shí)結合細菌特殊形態(tài)結構及排列方式，對病原菌可進(jìn)行初步鑒定。②選擇藥物參考：G⁺菌與G^-菌對一些抗生素表現出不同的敏感性。③與致病性有關(guān)： 大多G⁺菌的致病物質(zhì)是外毒素，而G^-菌大多能產(chǎn)生內毒素，兩種致病作用不同。

　�。�2）抗酸染色：抗酸染色也可將細菌分為兩大類(lèi)：即抗酸性細菌和非抗酸性細菌。因為臨床上絕大多數病原菌為非抗酸性細菌，所以抗酸染色不作為臨床上常規的細菌檢查項目，只針對性用于結核病、麻風(fēng)病等的細菌檢查。疑似結核分枝桿菌感染的標本，經(jīng)抗酸染色后以油鏡檢查，即可作出初步鑒定。若查見(jiàn)紅色抗酸桿菌，可報告為“找到抗酸分枝桿菌”。對臨床疾病的診斷和治療具有重要參考價(jià)值。

　　3.熒光染色：熒光染色法敏感性強，效率高而且容易觀(guān)察結果，在臨床細菌鑒定中有很大的實(shí)用價(jià)值。主要用于結核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、白喉棒狀桿菌及痢疾志賀菌等的檢測。如痰標本涂片、固定，用熒光染料金胺O法（也稱(chēng)金胺O-羅丹明B法）染色，以熒光顯微鏡檢查，在暗背景中可觀(guān)察到呈金黃色熒光的菌球。

　　除以上所述染色方法外，用于細菌鑒定的還有鞭毛染色、異染顆粒染色等。

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