電鏡樣品制備方法

　　投射電子顯微鏡的觀(guān)察樣品的主要制備方法是：

　　1、投影法

　　在真空條件下，用電子散射能力強的重金屬原子來(lái)噴鍍樣品表面，這樣在樣品和沒(méi)有噴鍍的區域形成了較強的反差，而沒(méi)有噴鍍的部分成了樣品的投影，根據投影我們可以了解樣品的立體形狀、高度，通常用這種方法來(lái)觀(guān)察細菌的鞭毛或病毒的顆粒。

　　2、負染法

　　因為這種方法是將樣品的背景染色以突顯樣品，所以稱(chēng)為負染。一般是用電子密度高，本身不會(huì )顯示任何結構，又和樣品不起反應的物質(zhì)，例如磷鎢酸的鈉鹽將樣品包圍，同時(shí)染色劑還會(huì )投入觀(guān)察對象的內部，這樣，既能顯示外形，又可在一定程度上反應樣品的內部結構。用這種方法可以觀(guān)察細菌細胞、病毒等。

　　3、超薄切片法

　　這是最常用的方法，因為可以觀(guān)察細胞或其它樣品內部的細微結構。通常是要按照一定程序對樣品進(jìn)行固定，脫水，然后包埋在樹(shù)脂中作為支持物，用超薄切片機切成極薄的切片。因為只有在20～100納米厚度的切片用投射電子顯微鏡才能觀(guān)察，所以一般細菌樣品，一個(gè)細胞要分割成10片到50片。

　　4、冰凍蝕刻法

　　所謂冰凍蝕刻，是把樣品放在-196℃的液態(tài)氮中迅速冷凍，然后加溫到-100℃，使樣品變得非常脆弱易碎，再用預先也冷卻到-196℃的非常鋒利的玻璃斷口切割經(jīng)冷凍的樣品，這樣使樣品在最容易斷裂的部位斷開(kāi)（如果是微生物細胞，則多半是沿內膜中部），然后讓樣品放在真空條件下升華掉斷口處的冰，最后用重金屬?lài)婂冊摂嗫诒砻�，即可用電子顯微鏡觀(guān)察其結構。用這種制備方法的優(yōu)點(diǎn)是可以避免在固定、脫水和包埋過(guò)程中造成細胞結構的人為改變而形成的假象。

　　和投射電子顯微鏡是靠透過(guò)物體的電子成像不同，掃描電子顯微鏡的成像是靠觀(guān)察物體表面發(fā)射的電子。掃描電子顯微鏡是用聚焦得很細的電子束在樣品表面掃描。電子激發(fā)樣品表面的原子放電，釋放出微細的電子簇（二次電子），用靈敏的檢測裝置可以捕獲它們，然后通過(guò)類(lèi)似電視機的原理將樣品圖象呈現出來(lái)。二次電子對檢測器的作用取決于樣品表面的性質(zhì)，當電子激發(fā)樣品表面突起部位時(shí)，會(huì )有大量二次電子進(jìn)入檢測器，而表面凹陷處則只有少量二次電子進(jìn)入，所以可以顯出反差突出、明暗清晰的三維圖象。而且它的成像焦深較長(cháng)，圖象的立體感強，和肉眼所見(jiàn)差別不大。制備掃描電子顯微鏡的樣品也先要經(jīng)過(guò)固定、脫水等處理，以免在真空條件下變形失真，為了獲得較多的二次電子，表面要噴涂重金屬和碳原子。

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