凝膠法測定細菌內毒素

    凝膠法是通過(guò)在有內毒素存在的情況下利用鱟試劑產(chǎn)生凝集反應來(lái)檢測或定量?jì)榷舅氐姆椒�。在標準環(huán)境中，能夠使鱟試劑產(chǎn)生凝集的內毒素的最低濃度即為鱟試劑的標示靈敏度。 

1、試驗前的準備工作與材料 
   試驗所用器皿需經(jīng)處理除去可能存在的外源性?xún)榷舅兀ǔＳ玫姆椒ㄊ?50℃干烤至少1h，也可用其他適宜的方法）。同時(shí)試驗所用器皿應確保不干擾細菌內毒素的檢查；試驗操作過(guò)程應防止微生物的污染。材料與器具：①細菌內毒素工作標準品；②鱟試劑；③細菌內毒素檢查用水；④旋渦混合器和37℃士1℃試管恒溫儀；⑤10mm*75mm試管或復溶后的0.1ml/支規格的鱟試劑原安瓿；⑥稀釋容器（大口徑試管、小三角瓶、小磨口瓶、抗生素瓶或安瓿）；⑦移液器材（1、2、5、0.5移液管或移液槍?zhuān)�；⑧試管架或試管浮板；⑨其他用具：酒精燈、消毒酒精棉球、剪刀、砂輪、鑷子、封口膠布、油性筆、標記紙。 

2、鱟試劑靈敏度復核：當使用新一批鱟試劑或試驗環(huán)境中發(fā)生了可能會(huì )影響檢驗結果的改變時(shí)，須進(jìn)行鱟試劑靈敏度復核試驗。 
    根據鱟試劑靈敏度的標示值，將細菌內毒素國家標準品或細菌內毒素工作標準品用細菌 內毒素檢查用水溶解，在旋渦混合器上混合15min，然后制成2.0入、入、0.5入和0.252等4個(gè)濃度的內毒素標準溶液，每稀釋一步均應在旋渦混合器上混勻30s，取裝有0.1ml鱟試劑溶液的10mm*75mm試管或復溶后的0.1ml/支規格的鱟試劑原安瓿，等體積加入內毒素標準溶液。每一個(gè)濃度平行做4管，同時(shí)在2管中加入0.1ml細菌內毒素檢查用水作為陰性對照。將試管 中溶液輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37士1℃適宜恒溫器中，保溫60士2min。 將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉180℃時(shí)，管內凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽(yáng)性，記錄為（+）；凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（-）。保溫和拿取試管過(guò)程應避免受到振動(dòng)造成假陰性結果。 
    若最大濃度2.0入管均為陽(yáng)性，最低濃度0.25入管均為陰性，陰性對照管為陰性時(shí)，試驗方為有效。按式計算反應中點(diǎn)濃度的幾何平均值，即為鱟試劑靈敏度的測定值（入c）。    

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