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臨床非培養標本的采集及處理操作程序
1 目的：規范臨床待檢標本的正確采集、送檢和處理。
2 適用范圍：微生物檢驗實(shí)驗室的所有臨床檢測標本。
3 職責：
3.1 所有采集標本的人員均需按本SOP 操作，實(shí)驗室工作人員有責任向臨床醫生、護士或病人
宣教。
3.2 本標準操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本SOP 的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準簽字：
室負責人、科主任。
4 操作程序
4.1 本實(shí)驗室檢測標本為：血清或血漿、痰、生殖道拭子標本、尿液及腦脊液和胸腹水。
4.2 做好標本簽收，核對檢驗單與標本標簽是否清楚無(wú)誤，送檢標本是否正確、合格，給所有標
本按順序編號，按如下操作規程操作。
4.3 查找抗酸菌操作:將標本置于水浴蒸箱加溫殺菌30 分鐘，取標本殘留物或沉淀物加溫涂布玻
片，液性標本以3000 轉/分鐘離心5 分鐘，取標本殘留物或沉淀物加溫涂布玻片并標注編號后
固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加溫(用酒精燈在玻片下來(lái)回加溫置染色液冒熱氣，
但無(wú)氣泡產(chǎn)生為宜)染色10 分鐘，自來(lái)水沖洗凈染液，以硫酸美蘭復染2 分鐘，水洗涼干。
鏡檢與報告：油鏡下查找分枝、不規則紅色桿菌，按如下標準進(jìn)行結果報告。
1)、鏡檢100-300 個(gè)視野（時(shí)間不少于4 分鐘）未發(fā)現抗酸菌，繼續觀(guān)察至300 個(gè)視野仍未發(fā)
現抗酸菌者報告抗酸菌（—）；
2)、鏡檢100 個(gè)視野找到抗酸菌1-2 條者，報告抗酸菌可疑（±），或重涂片或重送標本檢查；
3)、鏡檢100 個(gè)視野找到抗酸菌3-9 條者，報告抗酸桿菌陽(yáng)性（＋）；
4)、鏡檢10 個(gè)視野找到抗酸菌1-9 條者，報告抗酸桿菌陽(yáng)性（2＋）；
5)、鏡檢每個(gè)視野找到抗酸菌1-9 條者，報告抗酸桿菌陽(yáng)性（3＋）；
6)、鏡檢每個(gè)視野找到抗酸菌多于9 條者，報告抗酸桿菌陽(yáng)性（4＋）。
4.4 查找普通細菌操作：液性標本取離心沉淀物涂片，拭子或膿性標本直接涂布玻片并標注編號
后固定。同時(shí)取大腸標準株(ATCC25922)和金黃色葡萄球菌標準株（ATCC25922）涂片，一起行
革蘭氏染色，先滴加第一液染色1 分鐘，水洗，加第二液媒染1 分鐘，水洗干凈；以95%酒精
脫色30 秒鐘后立即水洗，再加第四液復染30 秒鐘，水洗后涼干。油鏡下查找菌體并觀(guān)察球桿
比例；觀(guān)察質(zhì)控菌是否合格。
4.5 墨汁染色查找隱球菌：液性標本離心取沉淀物涂片，膿性或拭子標本直接涂片并寫(xiě)號，以無(wú)
菌接種環(huán)粘取少量印度墨汁與玻片上標本混勻，壓蓋玻片，先低倍鏡下找到視野再轉離倍鏡觀(guān)察。
若找到透亮，圓形強折光，有厚莢膜的菌體報告墨汁染色陽(yáng)性；否則報告陰性。
4.6 白帶常規檢查：鹽水管直接將棉簽點(diǎn)至玻片后以高倍鏡檢有無(wú)滴蟲(chóng)；涂片標注編號后固定，
行革蘭氏染色，先滴加第一液染色1 分鐘，水洗，加第二液媒染1 分鐘，水洗干凈；以95%酒
精脫色30 秒鐘后立即水洗，再加第四液復染30 秒鐘，水洗涼干后鏡檢查找革蘭氏陰性雙球菌、
霉菌或陽(yáng)性球菌、線(xiàn)索細胞等。陰道清潔度的按如下判斷標準報告：
Ⅰ度：陰道桿菌為主，并可見(jiàn)大量上皮細胞。
Ⅱ度：有部份陰道桿菌，但亦有部份膿細胞和雜菌，上皮細胞少見(jiàn)。
Ⅲ度：僅見(jiàn)少量陰道桿菌和上皮細胞，有大量膿細胞和雜菌。
Ⅳ度：鏡下無(wú)陰道桿菌，除少量上皮細胞外，主要的幾乎全是膿細胞和大量雜菌。
4.7 肥達試驗：標本標明編號，以3000 轉/分鐘離心5 分鐘；取試管架，按每標本排5 排試管，
每排5 支；各標本用加樣器取100μl 血清置于一支稀釋用試管(注明檢驗號)中，加入1.9ml 0.9%
生理鹽水混勻，第一排加入1：20 倍稀釋血清各0.2ml，成1：40 倍；后稀釋管再加入1.0ml 0.9%
生理鹽水，成1：40 倍稀釋?zhuān)尤氲诙旁嚬芨?.2 ml。同樣方法對倍稀釋至第四排試管，第
五排各加入0.2ml 0.9%生理鹽水作陰性對照。從冰箱中拿出肥達反應試驗稀釋菌懸液，第一列
各加入H 診斷菌液0.2 ml,第二列各加入O 診斷菌液0.2 ml，第三列各加入甲型診斷菌液0.2 ml,
第四列各加入乙型診斷菌液0.2 ml, 第五列各加入丙型診斷菌液0.2 ml,混勻，置37℃水浴箱
18-24 小時(shí)。
結果判斷：菌體沉淀至試管底成圓點(diǎn)為陰性管，出現散在顆粒狀凝集為陽(yáng)性管。以最高稀釋管出
現散在顆粒狀凝集為報告滴度。若陰性對照出現凝集則需重新稀釋配制診斷菌懸液重做試驗。
4.8 外菲氏試驗：標本標明編號，以3000 轉/分鐘離心5 分鐘；取試管架，按每標本排3 排試
管，每排5 支；各標本用加樣器取100μl 血清置于一支稀釋用試管(注明檢驗號)中，加入1.9ml
0.9%生理鹽水混勻，第一排加入1：20 倍稀釋血清各0.2ml，成1：40 倍；稀釋管留1.0ml 再
加入1.0ml 0.9%生理鹽水，成1：40 倍稀釋?zhuān)尤氲诙旁嚬芨?.2 ml。同樣方法對倍稀釋至
第四排試管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理鹽水作陰性對照。從冰箱中拿出外菲氏反應試驗稀
釋菌懸液，第一列各加入OX19 診斷菌液0.2 ml,第二列各加入OX2 診斷菌液0.2 ml，第三列各
加入OXK 診斷菌液0.2 ml,混勻，置37℃水浴箱18-24 小時(shí)。
結果判斷：菌體沉淀至試管底成圓點(diǎn)為陰性管，出現散在顆粒狀凝集為陽(yáng)性管。以最高稀釋管出
現散在顆粒狀凝集為報告滴度。若陰性對照出現凝集則需重新稀釋配制診斷菌懸液重做試驗。
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