病毒的培養和檢測

   
   病毒研究的發(fā)展在脊椎動(dòng)物病毒方面，小鼠和雞胚接種、組織培養、超速離心、凝膠電泳、電子顯微鏡和免疫測定等技術(shù)，對病毒學(xué)的發(fā)展具有深刻的影響。   
   噬菌體的培養和檢測方法最是將噬菌體接種到易感細菌的肉湯培養物中，經(jīng)18～24小時(shí)后，混濁的培養物重新透明，此時(shí)細菌被裂解，大量噬菌體被釋放到肉湯中，再經(jīng)除菌過(guò)濾，即為粗制噬菌體。為了測定其中噬菌體的數量，將粗制噬菌體稀釋到每一接種量含100個(gè)左右，與過(guò)量的細菌混合，然后鋪種于瓊脂平皿上，在溫箱中培養過(guò)夜，細菌繁殖成乳白色襯底，被噬菌體裂解的區域則在此襯底上表現為圓形的透明斑，稱(chēng)為噬斑。噬斑數代表該接種量中有活力的噬菌體數量。如果挑出單個(gè)噬斑來(lái)培養，就能獲得由單個(gè)噬菌體所繁殖的后代，達到分離純化的目的。    
   動(dòng)物病毒的培養可在自然宿主、實(shí)驗動(dòng)物、雞胚或細胞培養中進(jìn)行，以死亡、發(fā)病或病變等作為病毒繁殖的直接指標，或以血細胞凝集、抗原測定等作為間接指標。收獲發(fā)病動(dòng)物的組織磨成懸液或有病變的細胞培養液，即為粗制病毒。測定活病毒數量可采用空斑法，其原理與噬斑法相同，但以易感的動(dòng)物單層細胞代替細菌，在接種適當稀釋的病毒后，用含有培養液和中性紅的瓊脂覆蓋，使病毒感染局限在小面積內形成病變區，襯底的健康細胞被中性紅染成紅色，病變區不染色而顯示為空斑。  
   至今植物病毒的培養和檢測大都是在整株植物上進(jìn)行的。從搗碎的病葉汁中制備病毒，常用枯斑法檢測。用手指蘸上混有金剛砂的稀釋病毒在植物葉片上軒輕摩擦，經(jīng)一定時(shí)間后出現單個(gè)分開(kāi)的圓形壞死或退綠斑點(diǎn)，稱(chēng)為枯斑。   
   除了利用病毒的致病性定量檢測病毒外，還可應用物理方法，如在電子顯微鏡下計數病毒顆粒（應用電子顯微鏡不但能看清病毒粒的大小、形態(tài)，還可以分辨其表面的蛋白亞單位和內部的核殼等超微結構），或用紫外分光光度計測定提純病毒的蛋白和核酸量，這些方法所測得的數據包括了有感染性和無(wú)感染性的病毒粒。

 

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