微生物專(zhuān)用酶快速反應系統的檢測技術(shù)

    微生物專(zhuān)用酶快速反應是根據細菌在其生長(cháng)繁殖過(guò)程中可合成和釋放某些特異性的酶，按酶的特性，選用相應的底物和指示劑，將他們配制在相關(guān)的培養基中。根據細菌反應后出現的明顯的顏色變化，確定待分離的可疑菌株，反應的測定結果有助于細菌的快速診斷。這種技術(shù)將傳統的細菌分離與生化反應有機的結合起來(lái)，并使得檢測結果直觀(guān)，正成為今后微生物檢測發(fā)展的一個(gè)主要發(fā)展方向。 

    利用細菌中某些具有特征性的酶，應用適當的底物可迅速完成細菌鑒定。如沙門(mén)氏菌具有辛酸酯酶，以4MU-辛酸酯為底物，經(jīng)沙門(mén)氏菌酶解，在紫外燈下觀(guān)察游離4MU的熒光�？ㄋ�莫拉菌具有丁酸酯酶，可用丁酸配色原底物快速鑒定等Delise等新合成一種羥基吲哚-β-D葡萄糖甘酸(IBDG)，在β-D葡萄糖苷酶的作用下，生成不溶性的藍，將一定量的IBDG加入到麥康凱培養基瓊脂中制成MAC-IBDG平板，35℃培養18h，出現深藍色菌落者為大腸埃希氏陽(yáng)性菌株。其色彩獨特，且靛藍不易擴散，易與乳糖發(fā)酵菌株區別。王金良教授等應用β-萘酚辛酯酶為底物，經(jīng)沙門(mén)氏菌酶解，釋出β-萘酚與固蘭作用出現紫色，反應在紙片上進(jìn)行，只需5min即可完成沙門(mén)氏菌的鑒定。這對食品與環(huán)境衛生檢驗有重要價(jià)值。運用大腸菌群特有的β-D-半乳糖苷酶系統，能分解4-甲基傘形酮-β- D-半乳糖苷（MUG）為葡萄糖苷和甲基傘形酮,其可在長(cháng)波UV光下（366nm）產(chǎn)生熒光。以此作為確認是否有大腸菌群和大腸艾希氏菌存在的依據。還可用于大腸菌群和大腸埃希氏菌計數。

    氧化物酶法,最近研究表明，一種專(zhuān)利名稱(chēng)為氧化物酶物質(zhì)，能刺激食品中存在的主要兼性厭氧病原菌的生長(cháng)，在有氧的條件下，這種酶可將氧氣轉化為H2O，減少了培養基中氧的密度，造成厭氧條件，有助于兼性厭氧微生物的生長(cháng)。在培養劑中，這種酶僅含0．1單位／mL就會(huì )大大刺激單核細胞增生李斯特菌、大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、腐敗鏈球菌和普通變形菌的生長(cháng)，在這種酶的存在下，35℃-42℃培養5-8h，細菌數比常規培養法多l-2個(gè)對數單位。這種酶的實(shí)際應用，在于可使食品中的主要病原微生物，受到這種酶的作用，幾小時(shí)可以長(cháng)到較高的菌數(16 CFU ／mL)，經(jīng)培養后，就能用現代化的檢測方法(例如DNA探針技術(shù)和聚合酶連鎖反應技術(shù))進(jìn)行快速檢測，因而可以加快對病原菌的檢測速度。

上一篇：食源性常規檢測技術(shù)的改進(jìn)——以生物化學(xué)手段建立的快速檢測技術(shù)

下一篇：食源性致病菌檢測技術(shù)——分子生物學(xué)方法鑒定系統