致瀉性大腸埃希氏菌——快速酶觸反應

    致瀉性大腸埃希氏菌能使人類(lèi)致病，監診表現主要為嚴重腹瀉，多數表現為敗血癥。根據血清型別、毒力和所致臨床癥狀可分為產(chǎn)腸毒素性大腸埃希氏菌（ETEC）、腸致病性大腸埃希氏菌（EPEC）、腸侵襲性大腸埃希氏菌（EIEC）、腸出血性大腸埃希氏菌（EHEC）以及腸粘附性大腸埃希氏菌（EAEC）五類(lèi)。

    快速酶觸反應：

    大腸埃希氏菌具β-葡萄糖醛酸酶，但以O157：H7為代表的腸出血性大腸埃希氏菌（EHEC）卻不具此酶。

    毒素及毒力因子檢測：包括LT、ST、Hly、SLT、Stx、EaeA、VT、EAST等，過(guò)去多用動(dòng)物或細胞培養測定，現可用其單抗以多種免疫學(xué)手段檢出，也可用基因探針技術(shù)或PCR等分子生物學(xué)技術(shù)檢測。同時(shí)檢測Hly和SLT基因，能快速檢測和鑒定EHEC菌株，并與EPEC區分開(kāi)來(lái)。

    基因探針和PCR技術(shù)：國內徐建煙根據溶血素hlyAB基因序列設計了鑒定EHEC的特異DNA探針，敏感性特異性達99%。Fortin將套式PCR技術(shù)和熒光探針技術(shù)相結合來(lái)檢測O157，該方法不僅可以鑒定與O157抗血清有交叉反應的菌株，而且靈敏度高，可檢測牛奶和蘋(píng)果汁中102CFU/ml，的細菌，如果先進(jìn)行6h增菌，可檢測1CFU/ml的細菌。
基因芯片：Chizhikov將6個(gè)編碼大腸桿菌細菌抗原和毒力的特異基因探針（EaeA，SltI，SltII，FliC，RfbE，IpaH）點(diǎn)樣在玻片上，取多重PCR擴增產(chǎn)物與之雜交，用于同時(shí)檢測和鑒定食物中毒相關(guān)的腸道病原體，該芯片可同時(shí)檢測15種沙門(mén)菌、志賀菌和大腸桿菌的毒力因子。

    細胞粘附試驗：傳統的細胞粘附試驗是檢測EIEC的標準方法。方法為在24孔板的孔中圓形玻片上培養的HEP-2細胞單層，生長(cháng)致50%；待檢菌以L(fǎng)肉湯培養，37℃，靜止培養16h；每孔加入20ul菌液（含2×107個(gè)菌），置37℃，5%CO2溫育3h，培養液中含1%α-甲基-D-甘露醇；Hank’s平衡鹽溶液洗培養板3次；70%乙醇固定，10%Giema染色，取出圓形玻片，置載玻片上，油鏡觀(guān)察。

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