致病性副溶血性弧菌的檢測——PCR方法

    PCR方法

    1999 年 ,Yamaichi 等 已經(jīng)完成副溶血性弧菌的基因組測序 ,VP的毒力基因序列得到進(jìn)一步確定。針對致病性副溶血性弧菌的較好PCR檢測方法有多重 PCR 技術(shù)和熒光定量 PCR 技術(shù)。

    （1）多重 PCR技術(shù):Bej 等 根據副溶血性弧菌編碼不耐熱溶血素的 tlh 基因、耐熱直接溶血素的tdh基因和相對耐熱直接溶血素的 trh 基因設計引物 ,利用多重 PCR檢測 111 份樣品中的副溶血性弧菌 ,其敏感性高、特異性強 ,而且能區分產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株 ,遠優(yōu)于傳統細菌學(xué)方法。吳彩云等 建立了1 種雙重 PCR 方法 ,該方法可同時(shí)檢測攜帶有tl 和tdh基因的副溶血弧菌毒力菌株。結果表明 ,該法不但具有常規 PCR的優(yōu)點(diǎn) ,而且還能節省耗材和時(shí)間 ,可用于檢測水產(chǎn)食品以及臨床樣品中的副溶血弧菌的毒力菌株。

    （2）熒光定量 PCR技術(shù):Blackstone 等 建立了1 種基于 TaqMan探針的快速定量檢測含tdh的副溶血性弧菌的實(shí)時(shí) PCR方法 ,特異性檢測致病性副溶血性弧菌 ,該試驗的 DNA 靈敏度為 lCFU/PCR 體系 ,試驗快速、準確 ,整個(gè)反應 1h 內就可完成。該方法具有特異性、敏感性及精確性高的優(yōu)點(diǎn) ,同時(shí)避免了 PCR后續步驟 ,減少了產(chǎn)物污染的機會(huì )。

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