枯草芽孢桿菌的分離純化

一. 目的

    掌握芽孢桿菌屬常見(jiàn)種的分離、鑒定方法和技術(shù)。將土壤樣品中分離的芽孢桿菌屬未 知種鑒定到屬。

二．原理

    芽孢桿菌能產(chǎn)生芽孢， 在沸水中加熱不會(huì )失去生理活性， 但是不能產(chǎn)生芽孢的細菌會(huì )失 去活性，因而得到芽孢菌屬，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的分離及生理生化鑒定得到枯草芽孢桿菌。

三．材料和器皿

顯微鏡 培養皿 試管 三角瓶 燒杯 移液管 涂布棒 載玻片 接種環(huán) 接種針 試管架 滅菌鍋 培養箱 培養基：牛肉膏蛋白胨培養基 半固定培養基 淀粉培養基 v.p.實(shí)驗培養基 孔雀綠溶液 番紅復染液 NaOH 溶液等

四．操作步驟

 菌種的分離和純化

（1）土樣的采集：取土壤表層 5-10cm 下的肥土 100g 左右，把采得的土壤放入紙袋帶 回實(shí)驗室分離。

（2）平板的制備：溶化三角瓶中的牛肉湯蛋白胨培養基，以每皿 20ml 左右倒 6 個(gè)平 板。

（3）稀釋分離法：稱(chēng)取肥土 5g 放入含有 45ml 水的三角瓶中，搖動(dòng)片刻，然后將此瓶 用小火加熱至懸濁液沸騰， 維持 15min。 而后靜止 5min， 吸取上層液 0.1ml 加入到含有 4.5ml 無(wú)菌水的試管中，制成 1:100 濃度的懸液，然后分別吸取 10-2 和 10-3 土壤懸濁液各 0.2ml 滴加到上述牛肉湯蛋白胨培養基平板上（每種稀釋度 2 皿） ，用涂布棒均勻涂布，并將培養 基倒置于 37℃恒溫培養 1-2 天。

（4）挑菌及純化：從上述分離的平板上分別挑取 2 個(gè)單菌落中部分菌體，在牛肉膏蛋 白胨培養基上劃線(xiàn)純化，經(jīng)菌落特征的觀(guān)察和鏡檢，確定是芽孢桿菌屬純種后，從中選擇一 株轉接于牛肉膏蛋白胨斜面上，置 37℃培養 1-2 天后備用。 （菌體應呈桿狀，具芽孢，寬度 一致；菌落顏色、形狀、質(zhì)地、透明度等均一致）

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