標準菌株的復活、傳代及性能確認

1 標準菌株的復活

    標準菌株一般為安培裝凍干粉劑，依照隨產(chǎn)品附有的菌種復活方法，以及《人間傳 購回的標準菌株 標準菌株 染病微生物分類(lèi)目錄》和《實(shí)驗室生物安全通用要求》，在相應的生物安全水平下，開(kāi)啟包裝。用 75%酒精棉球擦拭安培瓶上部，可用砂輪或銼刀在安培瓶上部劃一小痕跡，用無(wú) 菌紗布包住安培瓶，兩手分別捏住安培瓶上下兩端，稍向外用力便可打開(kāi)安培瓶。 依據菌株特性選擇合適的培養基和培養條件，用無(wú)菌吸管吸適量的液體培養基加到凍干塊 上，吹打混勻成懸液，將全部懸液移入含有 5ml 合適的液體培養基中，將管中殘留的幾滴懸 液移種到斜面上，適宜的溫度培養一定的時(shí)間。觀(guān)察生長(cháng)狀況，可適當延長(cháng)培養時(shí)間。

2 菌株的性能確認

2.1 純度檢查 菌落形態(tài) 取復活后的培養物， 在相應的鑒別平板或非選擇平板上劃線(xiàn)分離， 培養出單菌落， 觀(guān)察菌落形態(tài)是否符合該菌株要求，同一平板上的單菌落大小，形狀、顏色、質(zhì)地、光澤是 否相似， 對于出現兩種以上形態(tài)的菌株， 應再分別挑取單菌落劃線(xiàn)， 檢測是否出現相同特征。

2.2 細胞形態(tài) 取劃線(xiàn)平板上的單菌落，革蘭氏染色反應應符合要求，且呈現一致性。

2.3 生化鑒定 必要時(shí)進(jìn)行生化鑒定

2.4 污染處理 如發(fā)現菌株有污染， 挑選目標菌培養成功后， 將培養物滅菌銷(xiāo)毀 （121℃30min）

3 菌株的傳代

3.1 標準儲備菌株的制備 標準儲備菌株是在經(jīng)多次傳代后制備的多份相同的菌株。 將復活后經(jīng)過(guò)性能確認的菌株的斜面培養物，用 0.85%的滅菌生理鹽水 0.5ml 洗斜面菌苔成 菌懸液 將上述菌懸液吸入滅菌管中，加入 0.5ml40%的滅菌甘油，混勻，密封。保藏溫度為—18℃

3.2 工作菌株的制備 由凍干或超低溫保存的標準儲備菌株經(jīng)一次傳代得到的菌株。 工作菌株不宜再傳代， 工作菌 株使用和儲存過(guò)程中嚴格遵守無(wú)菌操作，即不存在交叉污染，可以多次使用。保藏溫度為 4-6℃

3.3 制備好的菌株應由室主任統一編號，標識，專(zhuān)人專(zhuān)柜保藏。

上一篇：恙蟲(chóng)病立克次體

下一篇：幾種培養基的配制原則