神經(jīng)細胞培養基

    絕大多數培養基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營(yíng)養物質(zhì)。最廣泛應用的培養基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`s F12 也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規含有無(wú)機鹽和代謝添加劑(例如核苷酸)。MEM/F12 這兩種培養基各取1/2，形成神經(jīng)生物學(xué)最通用的培養基。Dulbecco`s改良培養基――DMEM，現應用于快速生長(cháng)的細胞，同MEM含有相同的營(yíng)養成分，但濃度高出2~4倍。選擇某種培養基，應仔細了解成分表，應知道大多數情形下培養基都有不足。例如，有些培養基在氨基酸中包括有谷氨酸，而這種培養基雖廣泛用于神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域，但它對某些對谷氨酸敏感的可能有細胞外毒性損傷的神經(jīng)元而言，則并非最佳選擇，特別是如果神經(jīng)元生長(cháng)在缺乏膠質(zhì)的環(huán)境中時(shí)。 F12中含有硫酸亞鐵，據報道也有神經(jīng)毒效應。

    在所有這些培養基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度，這是因為它具有不穩定性以及在許多細胞培養中它常用作碳源。對于神經(jīng)元的培養常常在基礎培養基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培養基中這兩種物質(zhì)缺乏時(shí))。MEM與F12均要用5% 的CO2來(lái)平衡，DMEM含更高濃度的NaCO3，要用10%的CO2來(lái)平衡，當然也可以在較低CO2濃度下使用。這些基礎培養基的組成成分是建立在對不同細胞系生長(cháng)的研究之上的，但通常在原代培養中使用也能有比較令人滿(mǎn)意的結果。

    原則上，HEPES作為緩沖劑可用來(lái)代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養環(huán)境的限制。實(shí)際操作中并非如此簡(jiǎn)單。顯然，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長(cháng)是重要的。Leiboviz`s L15培養基可用來(lái)在大氣環(huán)境中令神經(jīng)細胞生長(cháng)，該培養基采用了與眾不同的BSS作基礎，它含有高濃度的氨基酸來(lái)提高緩沖能力，培養基中使用半乳糖作碳源，以阻止培養基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產(chǎn)生。這一培養基的優(yōu)點(diǎn)是明顯的，特別是在保持較高CO2有困難時(shí)，例如在長(cháng)時(shí)間的顯微操作及生理學(xué)研究中。L15培養基已用來(lái)成功的培養了外周神經(jīng)元，但尚未在CNS神經(jīng)元的發(fā)育研究中全面檢測過(guò)。

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