冷凍干燥菌種的轉接技術(shù)

錄入時(shí)間:2012-1-12 16:48:40 來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng)

建議用下列方法恢復培養冷凍干燥保藏的菌種。

－、安瓶管開(kāi)封

1．用浸過(guò)70％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。

2．用火焰將安瓿管頂端加熱。

3．滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開(kāi)裂。

4．用挫刀或鑷子敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端。

二、菌株恢復培養

1．用無(wú)菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養基，滴人安瓿管內，輕輕振蕩，使凍于菌體溶解呈懸浮狀。

2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植于適宜的瓊脂斜面／平板培養基上，剩余的菌液，注入適宜的液體培養基內，然后在建議的溫度下培養。

3．若未能活化，或活化后有疑問(wèn)時(shí)，請于收到菌種1個(gè)月內，通知保藏中心，經(jīng)查證無(wú)誤后，即免費補寄。

三、注意事項

1．菌種活化前，請將安瓿管保存在6一10℃的環(huán)境下。

2．厭氧菌的培養，如無(wú)特別說(shuō)明，自開(kāi)封至接種完成，均需以無(wú)氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)。

3．某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(cháng)，需連續兩次繼代培養才能正常生長(cháng)，此時(shí)請將步驟二(2)重復一次。

液氮超低溫保藏程序：

1、容器的選擇：使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。

2、檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鐘，沖洗干凈，棄去含有藍色染料的安培瓶，其余的安培瓶備用。

3、打印標簽(激光打印)。

4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鐘，干燥并將打印好的標簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121℃滅菌30分鐘。

5、保藏菌菌齡：處于最大生長(cháng)量階段或對數生長(cháng)期后期。

6、保護劑：選用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護劑。